金雀異黃酮通過PI3K-AKT信號(hào)通路對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成的影響.pdf

1、背景：
　　肺動(dòng)脈高壓是一種持續(xù)進(jìn)展性的慢性心肺疾病，其主要的特征是肺血管重構(gòu)及持續(xù)性增加的肺動(dòng)脈壓力，最終導(dǎo)致右心室肥厚，右心衰竭和死亡。近年來，靶向藥物的使用提高了肺動(dòng)脈高壓生存率，但其作用有限且價(jià)格昂貴?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)植物雌激素金雀異黃酮（Genistein）具有舒張血管、心臟保護(hù)及抗炎效應(yīng)，雌激素β受體可能參與其發(fā)揮生物學(xué)作用。本課題組前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， Gen可以改善野百合堿所致肺動(dòng)脈高壓大鼠的肺動(dòng)脈壓力及提高其生存率，但

2、其作用機(jī)制并不清楚。多項(xiàng)研究既往表明P13K/AKT-eNOS信號(hào)通路可能參與這一過程，我們猜測(cè)Genistein可能通過PI3K/AKT信號(hào)通路上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的活性，增加內(nèi)皮型舒張因子一氧化氮（NO）的合成，從而舒張血管。
　　目的：
　　本研究旨在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）中探討植物雌激素金雀異黃酮（Genistein）是否通過PI3K/AKT信號(hào)通路上調(diào)eNOS的活性，增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO的

3、合成以及是否主要通過ERβ受體來發(fā)揮作用。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)HUVEC，分為對(duì)照組（完全培養(yǎng)基）、Genistein組（100nmol/L）， PI3K抑制劑 LY2942002（10μM）+Genistein（100nmol/L）組，AKT抑制劑MK-22062HCL（5μM）+Genistein（100nmol/L）組，eNOS抑制劑L-NAME（10mM）+Genistein（100nmol/L）組，雌激素

4、α受體拮抗劑 MPP（1μM）+Genistein（100nmol/L）組和雌激素β受體拮抗劑PHTPP（1μM）組+Genistein（100nmol/L）。
　　2、細(xì)胞處理48h小時(shí)后，用硝酸還原法測(cè)培養(yǎng)液中NO的含量，Western blot檢測(cè)各組總AKT（t-AKT）、總eNOS（t-eNOS）、磷酸化AKT（Ser473）以及磷酸化eNOS（Ser1177）表達(dá)水平，同時(shí)檢測(cè)ERα以及ERβ的表達(dá)水平。
　　結(jié)

5、果：
　　1、HUVEC經(jīng)Genistein（100nmol/L）培養(yǎng)48小時(shí)后，培養(yǎng)液NO的含量以及磷酸化AKT（Ser473）以及磷酸化eNOS（Ser1177）表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。
　　2、PI3K抑制劑LY2942002組、AKT抑制劑MK-22062HCL組、eNOS抑制劑L-NAME組與Genistein（100nmol/L）組相比，上述檢測(cè)項(xiàng)目表達(dá)水平均有所下降（P＜0.05），但仍高于對(duì)

6、照組（P＜0.05），抑制劑組各組間比較未發(fā)現(xiàn)明顯差異（P＞0.05）。
　　3、ERα和ERβ組NO的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），p-AKT（Ser473）、p-eNOS（Ser1177）表達(dá)比較差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　4、各組t-AKT、t-eNOS水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　金雀異黃酮對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO的誘導(dǎo)合成主要是通過PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)e