地塞米松對(duì)哮喘小鼠體內(nèi)一氧化氮、一氧化氮合酶作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景及實(shí)驗(yàn)?zāi)康模褐夤芟菄?yán)重危害當(dāng)代人健康的呼吸系統(tǒng)疾病，其以肺部嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道粘液增多及氣道高反應(yīng)性為主要特征，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、呼氣性呼吸困難、胸悶、咳嗽等。當(dāng)前哮喘發(fā)病有不斷增多的趨勢(shì)，因此探討有效治療哮喘的機(jī)制十分必要。 過(guò)敏原或感染等因素激發(fā)廣泛分布于呼吸道粘膜以及肺間質(zhì)內(nèi)的樹(shù)突狀細(xì)胞，后者遷移至抗原引流淋巴結(jié)，將有關(guān)抗原提呈給T淋巴細(xì)胞，生成大量II型輔助型T細(xì)胞并分泌白介素4、5等Ⅱ型細(xì)胞因

2、子，引起肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等釋放炎癥介質(zhì)，誘發(fā)氣道變應(yīng)性炎癥。過(guò)敏原、感染因素及相關(guān)細(xì)胞因子可刺激肺巨噬細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等表達(dá)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)，后者催化L-精氨酸生成高水平一氧化氮(NO)。正常時(shí)氣道局部構(gòu)成型NOS(eNOS)催化生成的低水平NO可松弛支氣管平滑肌，調(diào)節(jié)肺血流量，有利于呼吸正常進(jìn)行。而哮喘時(shí)iNOS催化生成的高水平NO則被認(rèn)為有利于氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并參與氣道高反應(yīng)性形成，從而促進(jìn)哮喘病情發(fā)展。

3、 當(dāng)前，治療哮喘最有效的藥物仍是糖皮質(zhì)激素。激素可以通過(guò)抑制哮喘發(fā)生發(fā)展中多種炎癥介質(zhì)的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)抗炎及緩解哮喘癥狀的作用。而對(duì)于較晚被認(rèn)識(shí)的iNOS及NO，糖皮質(zhì)激素是否也通過(guò)抑制二者在氣道局部乃至全身的產(chǎn)生從而實(shí)現(xiàn)對(duì)哮喘癥狀的抑制?本研究以卵白蛋白(OVA)致敏昆明小鼠建立哮喘模型，以不同劑量地塞米松治療哮喘小鼠，然后檢測(cè)小鼠肺組織和血清中的NO濃度以及iNOS水平，以探討二者尤其是iNOS在激素抗哮喘機(jī)制中所起的作用，為更好的

4、防治哮喘提供思路。 實(shí)驗(yàn)方法：將35只昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(A組)、哮喘模型組(B組)、地塞米松0.1 g/L治療組組(C1組)、地塞米松0.2g/L治療組(C2組)、地塞米松0.4g/L治療組組(C3組)，每組7只。B組在實(shí)驗(yàn)的第0天、第7天、第14天用0.08％OVA0.2 ml(以氫氧化鋁為佐劑)腹腔注射致敏，第15天起連續(xù)7天以1％OVA霧化激發(fā)，每次40分鐘；C1、C2、C3組小鼠以同樣方法致敏及激發(fā)，但每次激發(fā)前l(fā)

5、小時(shí)分別霧化吸入0.1g/L、0.2 g/L、0.4g/L地塞米松10分鐘；A組以無(wú)菌生理鹽水代替OVA，操作與B組相同。末次激發(fā)后行如下操作：心臟采血制備血涂片；取支氣管肺泡灌洗液(BALF)，觀察其中白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EOS％)；作肺組織病理學(xué)檢查，行HE染色，觀察各組肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的情況；NO、NOS試劑盒檢測(cè)血漿及肺組織中NO代謝產(chǎn)物含量及NOS活性；RT-PCR法檢測(cè)肺組織iNOS mRNA表達(dá)。 結(jié)

6、果：B組BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)及肺組織切片均提示急性氣道炎癥性改變，血涂片也顯示嗜酸性粒細(xì)胞增多；相比之下，C1、C2、C3組炎癥狀態(tài)明顯較弱，尤以C2組明顯，但與Cl、C3組差距無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清檢測(cè)表明：B組NO代謝產(chǎn)物顯著高于A組，Cl、C2、C3組NO代謝產(chǎn)物含量顯著低于B組；而血清iNOS和eNOS活性各組間都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。肺組織NO代謝產(chǎn)物含量及iNOS活性則均為治療組高于哮喘組，而治療組間無(wú)差異。RT-PCR結(jié)果表明：相比A組，