二甲雙胍和糖基化終產(chǎn)物對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶活性和表達(dá)的影響.pdf

1、目的：內(nèi)皮功能障礙在糖尿病大血管和微血管并發(fā)癥發(fā)展中起著重要作用。晚期糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products，AGEs）通過刺激內(nèi)皮細(xì)胞活化，上調(diào)內(nèi)皮黏附分子的表達(dá)，減少一氧化氮的釋放，抑制內(nèi)皮依賴的血管舒張，最終導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙。與健康個(gè)體相比，糖尿病患者體內(nèi)AGEs顯著增加，更易于發(fā)生內(nèi)皮功能障礙。二甲雙胍是目前市場上口服降糖藥之一，可抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，具有改善內(nèi)皮功能，保護(hù)血管的作用。本

2、實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平觀察晚期糖基化終產(chǎn)物對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶表達(dá)和活性的影響及二甲雙胍對其影響的改善作用。
　　 方法：1、膠原酶法分離、原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；2、實(shí)驗(yàn)分組：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞傳至第三代時(shí)，且細(xì)胞在正常培養(yǎng)基生長達(dá)70％融合狀態(tài)后隨機(jī)分為五組：（1）空白對照組：CON；（2）牛血清白蛋白組：BSA；（3）AGEs干預(yù)組：AGE；（4）二甲雙胍干預(yù)組：MET；（5）AGEs、二甲雙胍共干預(yù)組：AM；3、CCK

3、-8法測定HUVECs增殖；4、硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)HUVECs上清一氧化氮含量；5、分光光度法測定一氧化氮合酶相對活力；6、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：與CON組和BSA組相比，AGEs抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖，二甲雙胍促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖（P<0.01 vs CON；P<0.01 vs BSA）。AGEs抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性（P<0.01 vs CON

4、；P<0.01 vs BSA），呈劑量、時(shí)間依賴關(guān)系。與CON組比較，二甲雙胍增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性（P<0.01 vs CON）。與AGE組比較，二甲雙胍和AGEs共干預(yù)組增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性（P<0.05 vs AGE）。AGEs與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共孵育24 h后，引起內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)水平明顯下調(diào)；二甲雙胍能有效改善這種作用（P<0.01 vs AGE）。