
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
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文檔簡(jiǎn)介
1、NO是內(nèi)皮細(xì)胞釋放的最重要的調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)之一,由eNOS催化產(chǎn)生。一氧化氮系統(tǒng)功能降低是內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的重要機(jī)制之一。因此,恢復(fù)一氧化氮系統(tǒng)的正常功能是治療心血管疾病的重要治療策略,開發(fā)相關(guān)藥物靶點(diǎn)為研制治療心血管疾病的藥物具有指導(dǎo)作用。
目的:1研究ATP敏感性鉀通道(KATP)開放劑埃他卡林及其衍生物激活KATP對(duì)eNOS磷酸化的影響。2研究膽堿能受體激動(dòng)劑對(duì)M3受體沉默后細(xì)胞釋放NO的影響。3激活非神經(jīng)性乙酰膽堿受
2、體對(duì)功能相關(guān)分子的影響。
方法:1在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞上給予(1)10-9-10-5mol/L不同濃度的納他卡林孵育5 min,(2)預(yù)孵育格列苯脲30min,給予1μmol/L納他卡林刺激5 min,提取細(xì)胞總蛋白,用Western Blot法檢測(cè)eNOS磷酸化位點(diǎn)S1177、S635、T495、S116及S615的變化。2在培養(yǎng)的EA.hy926細(xì)胞上,加入特異性M3受體siRNAs,36h后用免疫印跡法測(cè)定M3受體蛋白表達(dá)量
3、;在M3受體沉默的細(xì)胞模型上,以NO釋放量為觀察指標(biāo),分別研究10μmol/L的乙酰膽堿、氧化震顫素和檳榔堿對(duì)細(xì)胞功能的影響。3在內(nèi)皮細(xì)胞上分別孵育10μmol/L乙酰膽堿、氧化震顫素、毛果蕓香堿和煙堿12h,用Western Blot法測(cè)定Destrin,F(xiàn)KBP1A,MIF和Profilin-1的表達(dá)變化。
結(jié)果:1KATP通道開放劑納他卡林可濃度依賴性的升高S1177、S635位點(diǎn)的磷酸化和T495位點(diǎn)的去磷酸化,而對(duì)S
4、116、S615位點(diǎn)無影響。此作用可被KATP通道特異性阻斷劑格列苯脲拮抗。2毛果蕓香堿沒能刺激正常內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO;而乙酰膽堿、氧化震顫素和檳榔堿均可刺激正常內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO,此作用在M3受體沉默的細(xì)胞上消失。3內(nèi)皮細(xì)胞被施以乙酰膽堿和氧化震顫素后Destrin明顯減少;FKBP1A的蛋白表達(dá)也在乙酰膽堿、氧化震顫素和煙堿孵育后下調(diào)近70%。毛果蕓香堿孵育12h后, profilin-1明顯增加,MIF下降;施與煙堿的細(xì)胞, prof
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