Ghrelin通過PI3K-Akt通路抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成年大鼠心肌細(xì)胞凋亡.pdf

1、第一部分
　　 Ghrelin通過PI3K/Akt通路抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成年大鼠心肌細(xì)胞凋亡
　　 目的：觀察ghrelin對(duì)高濃度葡萄糖和棕櫚酸鈉誘導(dǎo)的成年大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響,并探討ghrelin抗凋亡的細(xì)胞分子機(jī)制。
　　 方法：分離培養(yǎng)原代成年大鼠心肌細(xì)胞,用高葡萄糖和游離脂肪酸誘導(dǎo)心肌細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激。采用annexin-v-FITC/PI染色和caspase-3底物發(fā)光法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡,DCFH-

2、DA熒光探針檢測(cè)心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激,ELISA檢測(cè)Akt和Erk磷酸化蛋白以及細(xì)胞核內(nèi)NFκB含量,realtimePCR和western blot檢測(cè)抗凋亡基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①ghrelin能夠抑制高糖和棕櫚酸鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡(P＜0.05),但不能抑制氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。②ghrelin的抗凋亡作用能夠被wortmannin阻斷(P＜0.05),但不能被PD98059阻斷。③ghrelin能夠刺激Akt和Erk1/2磷

3、酸化,并且促使NFκB向細(xì)胞核移位。④wortmannin能夠抑制NFκB向細(xì)胞核移位。⑤realtimePCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)c-iap基因的表達(dá)在ghrelin刺激8h后達(dá)到高峰,是對(duì)照組的17.9倍。Bcl-2、bcl-xl和c-fos基因表達(dá)20h后達(dá)到高峰,分別是對(duì)照組的12.2、4.4和4.3倍。⑥1μ Mghrelin刺激24h后,IAP-1和Bcl-2蛋白在心肌表達(dá)較對(duì)照組分別上升3.67倍和2.59倍。
　　 結(jié)論：g

4、hrelin有抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的作用,但ghrelin不具有抗氧化作用。Ghrelin通過激活PI3K/Akt通路,導(dǎo)致BAD磷酸化,以及NFκB向細(xì)胞核轉(zhuǎn)位增加抗凋亡基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)抗凋亡作用。
　　 第二部分
　　 PI3K調(diào)節(jié)亞基P85α在自發(fā)性糖尿病大鼠心肌中表達(dá)下降
　　 目的：研究糖尿病晚期病變心肌的胰島素信號(hào)通路的改變。
　　 方法：選用Otsuka Long-Evans Toku

5、shima Fatty(OLETF)和Long EvansTokushima Otsuka(LETO)分別作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。采用基因芯片、相對(duì)定量Realtime PCR、Western blotting方法比較OLETF和LETO大鼠心肌p85α表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：與LETO組大鼠相比,OLETF大鼠血漿胰島素水平下降(0.27±0.13 vs.2.39±0.34 ng/ml,p＜0.000),甘油三脂和膽固醇增加(1.

6、73±0.34 vs.0.48±0.08 mmol/L,p＜0.000;4.41±0.21 vs.2.25±0.75 mmol/L,p＜0.001),左心室內(nèi)壓舒張期下降速率(-dp/dt)降低30％(p＜0.05)。基因芯片檢測(cè)顯示OLETF心肌組織中P85α基因表達(dá)量減少達(dá)8倍之多。Realtime-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)證實(shí)OLETF大鼠的P85α基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平較對(duì)照組大鼠分別下降了81.5％和43.2％(P＜0.05、P＜0