2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  研究補(bǔ)腎組分淫羊藿素對(duì)香煙煙霧提取物(CSE)誘導(dǎo)的人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(A549細(xì)胞)氧化應(yīng)激的影響,并從固有的抗氧化通路(PI3K-Akt和Nrf2通路)探討其機(jī)制。
  方法:
  (1)以2.5%,5%,10% CSE刺激A549細(xì)胞,24小時(shí)后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,選出合適濃度的CSE進(jìn)行試驗(yàn);
  (2)以1μ M,10μ M,100μM ICT干預(yù)A

2、549細(xì)胞,24小時(shí)后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,選出適合濃度的ICT進(jìn)行試驗(yàn)。
  (3)以10μ M ICT預(yù)培養(yǎng)A549細(xì)胞1小時(shí)后加入5%、10%CSE刺激24小時(shí)后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,與單純CSE刺激組相對(duì)比。
  (4)培養(yǎng)A549細(xì)胞,并分組。
  A組:正常對(duì)照組;
  B組:5% CSE刺激模型組;
  C組:IC

3、T10μ M干預(yù)組;
  D組:ICT10μ M干預(yù)1小時(shí)后予5% CSE刺激組;
  E組:AKT抑制劑LY294002干預(yù)1小時(shí)后加ICT10μM干預(yù)1小時(shí)后予5% CSE刺激組;
  F組:Nrf2 siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后加入ICT10μM干預(yù)1小時(shí)后予5% CSE刺激組;
  (5)檢測(cè)指標(biāo)如下:
  1)倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;
  2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS變化;

4、r>  3) GSH檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH變化;
  4) Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2、P-Akt蛋白的變化;
  5) Real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GCLM mRNA變化。
  結(jié)果:
  (1)不同濃度CSE均可抑制細(xì)胞增殖,且該作用呈濃度依賴性。
  (2)中、低濃度(1μM,10μM)ICT對(duì)細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用;高濃度(100μM) ICT對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響。

5、  (3)10μ M ICT對(duì)CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
  (4) CSE可顯著引起細(xì)胞內(nèi)ROS釋放,而ICT提前干預(yù)則可降低ROS產(chǎn)生。
  (5)與單獨(dú)CSE刺激組相比,ICT提前干預(yù)1小時(shí)可增加細(xì)胞內(nèi)GSH含量。
  (6)與單獨(dú)CSE刺激組相比,ICT促進(jìn)GCLM基因轉(zhuǎn)錄,與此同時(shí),Nrf2蛋白核轉(zhuǎn)位和細(xì)胞內(nèi)磷酸化Akt蛋白明顯增加。
  (7)采用siRNA技術(shù)沉默Nrf2后,ICT對(duì)Nrf2

6、下游的抗氧化基因GCLM的轉(zhuǎn)錄無(wú)促進(jìn)作用。
  (8)采用Akt抑制劑LY294002干預(yù)后,ICT對(duì)Nrf2的核轉(zhuǎn)位及其下游抗氧化基因GCLM的轉(zhuǎn)錄無(wú)促進(jìn)作用,同時(shí)對(duì)ROS的釋放無(wú)明顯抑制作用。
  結(jié)論:
  1.CSE可誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激,從而引起細(xì)胞損傷和死亡。
  2.補(bǔ)腎組分淫羊藿素是一種新型抗氧化劑,對(duì)于CSE誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,可為COPD的抗氧化治療提供新選擇;

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