Nrf2信號(hào)通路在鉛致SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用.pdf

1、目的：鉛作為環(huán)境中廣泛存在的重金屬污染物,對(duì)人體神經(jīng)、腎臟、內(nèi)分泌、免疫、全身血液等各系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用,其毒性作用廣泛且缺乏特異性。長時(shí)期低水平的鉛暴露對(duì)兒童智能發(fā)育和體格生長的影響更加顯著。本實(shí)驗(yàn)研究神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Nrf2信號(hào)通路是否對(duì)鉛暴露所致的氧化應(yīng)激產(chǎn)生應(yīng)答及其可能的機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y細(xì)胞)為靶細(xì)胞。設(shè)一個(gè)對(duì)照組和三個(gè)鉛染毒組,三個(gè)劑量組分別為低劑量組(5μmol/L)、中劑量組(25

2、μmol/L)和高劑量組(125μmol/L),對(duì)體外生長的SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行染毒。通過2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)熒光探針檢測染毒2h后細(xì)胞內(nèi)活性氧(reaetive oxygen species,ROS)含量;通過二硫代雙硝基苯甲酸(Dithiothymine double-nitrobenzonic acid,DTNB)比色法檢測染毒24

3、h后細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;通過蛋白印跡(Western Blot)法檢測細(xì)胞中蛋白激酶C-δ(protein kinase C-δ,PKC-δ)、酪氨酸激酶2(casein kinase 2,CKⅡ)的表達(dá)水平以及胞漿和胞核中核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：細(xì)胞內(nèi)ROS含量按對(duì)照組、低劑量

4、組、中劑量組和高劑量組順序表現(xiàn)出逐漸增加的趨勢,與對(duì)照組相比,中劑量組和高劑量組表現(xiàn)出明顯增高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);而GSH含量則表現(xiàn)出逐漸降低的趨勢,與對(duì)照組相比,各染毒組細(xì)胞內(nèi)GSH含量均表現(xiàn)為顯著降低(P<0.05)。
　　與對(duì)照組相比,染毒組胞漿中Nrf2蛋白表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而各染毒組之間的差異不明顯;與對(duì)照組相比,高劑量組細(xì)胞胞核中Nrf2蛋白表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P<0.05),而低劑量組和中劑量組與對(duì)照組相比,胞核中Nrf2蛋白表達(dá)無明顯差異。
　　高劑量組細(xì)胞染毒6h、12h和24h后,胞漿中Nrf2蛋白表達(dá)均明顯降低,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而胞核Nrf2表達(dá)中,僅有染毒24h后呈現(xiàn)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而染毒6h和染毒12h后胞核Nrf2表達(dá)與對(duì)照組的差異并不明顯。
　　與對(duì)照組相比,染毒組細(xì)胞PKC-δ蛋白表達(dá)明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)