HO-1在鉛致SH-SY5Y細(xì)胞毒性中保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：鉛是環(huán)境中廣泛存在的一種有毒的重金屬，對(duì)人體有很嚴(yán)重的毒副作用。長(zhǎng)期鉛暴露對(duì)機(jī)體多個(gè)系統(tǒng)均有不良影響，其中危害最為嚴(yán)重的就是鉛的神經(jīng)毒性。血紅素加氧酶-1（Heme oxygenase，HO-1）在機(jī)體對(duì)抗外界環(huán)境因素刺激作用產(chǎn)生的一系列應(yīng)激防御中起著重要作用。研究表明，HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)對(duì)某些外來化合物的毒性具有一定的細(xì)胞保護(hù)作用，但HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)能否對(duì)鉛所致神經(jīng)毒性具有良性作用仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過鈷原卟啉（CoPP）誘導(dǎo)S

2、H-SY5Y細(xì)胞內(nèi)HO-1過表達(dá)，研究HO-1對(duì)鉛所致SH-SY5Y細(xì)胞毒性作用及相關(guān)的機(jī)制。
　　方法：用不同劑量的CoPP溶液（1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L）誘導(dǎo)HO-1在SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，確定適宜的CoPP預(yù)處理濃度；然后用CoPP預(yù)處理細(xì)胞24h，隨后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行醋酸鉛染毒。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性，內(nèi)源性CO水平用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定，用2’，7’-二氯

3、熒光黃雙乙酸鹽熒光探針檢測(cè)細(xì)胞染毒6h后活性氧含量；用JC-10檢測(cè)線粒體膜電位；用Hoechst染色測(cè)細(xì)胞凋亡；熒光檢測(cè)Caspase-3/7活性；用western blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，CoPP處理使HO-1表達(dá)升高，并呈現(xiàn)出劑量依賴性，結(jié)果顯示5μmol/L CoPP作為預(yù)處理細(xì)胞的濃度較為適宜；CCK-8實(shí)驗(yàn)表明，與鉛染毒組相比較，CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞存活率升高；ELISA

4、方法測(cè)定內(nèi)源性CO表明PbAc染毒降低內(nèi)源性CO的含量（P<0.05），CoPP預(yù)處理的PbAc染毒組內(nèi)源性CO的含量與PbAc染毒組相比明顯增加（P<0.05）；醋酸鉛顯著增加SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS含量（P<0.05），CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯降低（P<0.05）；JC-10熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位顯示，PbAc染毒使細(xì)胞線粒體膜電位明顯降低（P<0.05），CoPP預(yù)處理的PbAc染毒組膜電位與單純?nèi)径窘M

5、相比有明顯升高（P<0.05）；Hoechst染色顯示，PbAc導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的凋亡增加（P<0.05），CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞凋亡率明顯降低（P<0.05）；熒光測(cè)Caspase-3/7活性顯示，醋酸鉛導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Caspase-3/7活性增加（P<0.05），CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞內(nèi)Caspase-3/7活性明顯降低（P<0.05）；western blot結(jié)果顯示，鉛染毒致使細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達(dá)水平升