柯里拉京對氧化應激損傷SH-SY5Y和N9細胞的保護作用及其機制研究.pdf_第1頁
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1、福建醫(yī)科大學博士學位論文柯里拉京對氧化應激損傷SHSY5Y和N9細胞的保護作用及其機制研究姓名:陳一燕申請學位級別:博士專業(yè):藥理學(神經(jīng)藥理)指導教師:陳崇宏20100401本課題應用人神經(jīng)母細胞瘤株(SHSY5Y細胞)和鼠小膠質(zhì)細胞(N9細胞),建立氧化應激損傷的體外細胞模型,探討柯罩拉京單體的神經(jīng)保護作用潛能。以叔丁基過氧化氫誘導損傷細胞,研究柯罩拉京對這兩種細胞的保護作用,觀察其對細胞抗氧化功能和自由基的影響;觀察柯里拉京對叔丁

2、基過氧化氫誘導SHSY5Y和N9細胞凋亡的抑制作用;觀察柯罩拉京對N9細胞過度激活引起的炎癥抑制作用:并對相關作用機制進行探討,為神經(jīng)退行性病變的防治和新藥開發(fā)提供可靠的實驗依據(jù)。2方法本課題首先應用SRB法檢測柯里拉京本身的細胞毒性:通過MTT法檢測細胞活性建立了叔丁基過氧化氫誘導細胞氧化應激損傷的體外模型;通過觀察細胞形態(tài)學的變化以及MTT法和LDH釋放法檢測細胞損傷程度考察了柯罩拉京非藥物毒性劑量下預處理對體外細胞氧化應激損傷的保

3、護作用。通過熒光探針標記,以熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)活性氧變化,以激光共聚焦和流式細胞技術觀察細胞線粒體膜電位變化;通過生化比色法檢測細胞總抗氧化能力TAOC、抗氧化酶SOD活力,脂質(zhì)過氧化等,探討柯里拉京抗氧化特性在對叔丁基過氧化氫誘導細胞氧化應激損傷保護作用中的作用。通過AO/EB染色法觀察細胞形態(tài)、瓊脂糖凝膠電泳分析細胞DNA片段化和流式細胞術分析細胞凋亡峰;通過酶活性檢測、免疫印跡法等分析細胞凋亡相關信號分子的表達,探討柯里拉京抗細

4、胞凋亡作用及其可能機制。通過Griess法和比色法分別檢測細胞NO的分泌和NOS活力;以ELISA法檢測炎癥相關因子TNF0【;實時熒光PCR法相對定量分析細胞iNOSmRNA基因的表達;以熒光免疫法細胞原位檢測NFKB激活核轉(zhuǎn)錄等,探討柯罩拉京的抗炎特性及其在抗N9細胞過度激活引起炎性反應的抑制作用。課題定量結(jié)果以均值標準差(;。)表示;組問均數(shù)比較采用單因素方差分析和卜檢驗法,P005為差異顯著。3結(jié)果(1)保護作用柯里拉京在高濃度

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