丹參酮ⅡA對氧化應激誘導心肌細胞凋亡的作用.pdf

1、本課題分兩部分進行。第一部分體外細胞實驗在過氧化氫誘導乳鼠心肌細胞損傷的基礎上，觀察丹參酮ⅡA預處理后對心肌細胞是否有保護作用。第二部分采用大鼠心肌缺血再灌注作為體內(nèi)氧化應激誘導心肌凋亡模型，觀察在手術(shù)前兩周給予丹參酮ⅡA是否有抑制凋亡的作用，并探討其可能的作用機制。 一丹參酮ⅡA對過氧化氫誘導乳鼠心肌細胞損傷的保護作用 研究目的：建立過氧化氫誘導乳鼠心肌細胞損傷模型，在此基礎上研究丹參酮ⅡA對心肌細胞損傷是否具有保護作

2、用。 研究方法：采用本室建立的改良法培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，并建立過氧化氫損傷乳鼠心肌細胞模型，以細胞存活率、細胞形態(tài)學、DNA亞二倍體峰面積、DNAladder為指標評價過氧化氫對心肌細胞的損傷狀況，并觀察給予丹參酮ⅡA預處理2小時后上述心肌損傷指標的變化。 結(jié)果：1.MTT實驗結(jié)果顯示，0.2mM-0.8mM過氧化氫對乳鼠心肌細胞的損傷呈濃度依賴性，其中0.2mM，0.4mM過氧化氫對細胞的損傷呈時間依賴性，給予10-5、

3、10-6丹參酮ⅡA預處理2小時可劑量依賴性地抑制0.2mM，0.4mM過氧化氫對心肌細胞的損傷。 2.從DNA凝膠電泳結(jié)果可看出，0.1，0.2，0.4mM過氧化氫可劑量依賴性地誘導心肌細胞凋亡，10-5M，10-6M丹參酮ⅡA能減少DNAladder的形成，抑制凋亡的發(fā)生。其中10-5M丹參酮ⅡA的作用強于10-6M丹參酮ⅡA。 3.通過觀察細胞形態(tài)學改變，Hochest33342核染色改變以及DNA亞二倍體凋亡峰面積

4、變化進一步驗證，10-5M丹參酮ⅡA能夠部分抑制0.4mM過氧化氫導致的心肌細胞損傷和凋亡發(fā)生。 結(jié)論：1.利用本室建立的乳鼠心肌細胞改良法成功分離和培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，并在此基礎上成功地以過氧化氫為刺激因素體外模擬氧化應激誘導心肌細胞的損傷模型； 2.丹參酮ⅡA對過氧化氫導致的心肌細胞損傷具有保護作用。 二丹-參酮ⅡA對大鼠心肌缺血再灌注誘導心肌凋亡的影響 研究目的：為了進一步確定丹參酮ⅡA的抗凋亡作用，

5、本部分研究在大鼠冠狀動脈左前降支缺血再灌注損傷的基礎上觀察丹參酮ⅡA對心肌損傷和凋亡的影響及其可能的機制。 研究方法：1.將大鼠分為五組，分別為假手術(shù)組、缺血再灌注模型組、丹參酮ⅡA高劑量組+缺血再灌注組、丹參酮ⅡA中劑量組+缺血再灌注組、丹參酮ⅡA低劑量+缺血再灌注組。手術(shù)前兩周，假手術(shù)組和缺血再灌注組每天按10ml/kg灌胃給予0.5％CMC-Na，丹參酮ⅡA高中低劑量分別按60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg劑量

6、灌胃給藥。 2.檢測Caspase-3裂解活性亞型P17蛋白的表達，建立心肌缺血再灌注誘導凋亡模型的實驗方案。 3.通過組織HE染色觀察缺血再灌注后心臟組織病理改變以及丹參酮Ⅱ?qū)ζ涞挠绊憽２捎肨UNEL檢測斷裂DNA以及westernblot檢測Caspase-3P17活性蛋白表達的方法觀察丹參酮ⅡA是否具有抑制心肌凋亡的作用。 4.采用檢測血清SOD活性以及MDA水平的方法，探討丹參酮ⅡA抗心肌凋亡作用是否和其

7、抗氧化作用有關(guān)。 5.采用westernblot方法檢測各組大鼠心臟組織Bcl-2、Bax的表達，探討丹參酮ⅡA抗心肌凋亡作用是否和Bcl-2、Bax蛋白表達改變有關(guān)。 結(jié)果：1.大鼠冠狀動脈左前降支缺血45分鐘再灌注120分鐘可使心肌組織Caspase-3蛋白裂解成17KD的活性亞型。 2.高劑量和中劑量丹參酮ⅡA可明顯改善缺血再灌注心肌組織病理改變。 3.高劑量和中劑量丹參酮ⅡA可將缺血再灌注組TUN

8、EL陽性細胞率由19.37％分別降至5.33％和8％。低劑量丹參酮ⅡA心肌TUNEL陽性率和缺血再灌注組相比差異無統(tǒng)計學意義。三個劑量丹參酮ⅡA均未能使心肌Caspase-3裂解成17KD的活性亞型。 4.高劑量和中劑量丹參酮ⅡA可提高血清SOD活性和降低MDA水平，和缺血再灌注組相比差異有統(tǒng)計學意義。此外它們還可以上調(diào)Bcl-2蛋白的表達。低劑量丹參酮ⅡA上述指標的改變和缺血再灌注組相比差異無統(tǒng)計學意義。Bax蛋白表達在各實驗