丹參酮Ⅱ-A誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡分子機(jī)理研究.pdf

1、目的:1、進(jìn)一步證實(shí)丹參酮Ⅱ-A體外誘導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞(白血病和肝癌)凋亡的作用;2、應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析丹參酮Ⅱ-A對(duì)NB4和SMMC-7721細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)的影響;3、應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析丹參酮Ⅱ-A對(duì)NB4細(xì)胞凋亡等相關(guān)基因RNA表達(dá)的影響,探討丹參酮Ⅱ-A作用的分子機(jī)理.方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理:體外培養(yǎng)人急性早幼粒白血病細(xì)胞(NB4)和人肝癌(SMMC-7721)細(xì)胞系,分別用不同濃度(0.125,0.25,0

2、.5,1.0 mg.L<'-1>)丹參酮Ⅱ-A處理細(xì)胞24、48、72、96或120小時(shí)后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT檢測(cè),0.5 mg.L<'-1>丹參酮Ⅱ-A處理NB4和SMMC-7721細(xì)胞72或96小時(shí)后進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè).2、光鏡、電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變;3、細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT試驗(yàn)、集落形成試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖情況;4、瓊脂糖凝膠電泳分析細(xì)胞DNA"梯狀"斷裂;5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)改變;6、基因芯片技術(shù)分析NB

3、4細(xì)胞基因表達(dá)的改變:無毒劑量的丹參酮Ⅱ-A(0.5 mg.L<'-1>)處理細(xì)胞72小時(shí),收集細(xì)胞并提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,再轉(zhuǎn)錄并標(biāo)記成cRNA(Cy3熒光標(biāo)記),然后與Express Chip<'TM> H04芯片(包括3360基因點(diǎn))雜交,最后對(duì)芯片進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)分析(對(duì)信號(hào)值有2倍以上變化的基因及相應(yīng)的ID進(jìn)行對(duì)比分析).結(jié)論:1、小劑量丹參酮Ⅱ-A在體外能明顯誘導(dǎo)人急性早幼粒白血病細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞凋亡;2、參酮Ⅱ-