丹參和補骨脂的體外抑菌活性及隱丹參酮、二氫丹參酮Ⅰ的抑菌機制研究.pdf

1、本論文由三章組成。第一章綜述了目前中藥抑菌機制研究方法的進展。第二章研究了丹參和補骨脂生品及炮制品體外抑制會黃色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)和β-內(nèi)酰胺酶陽性的金黃色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑菌圈、最低抑菌濃度(MIC值)及半數(shù)抑菌濃度(IC50值)。第三章研究了隱丹參酮和二氫丹參酮Ⅰ對SA、MRSA和ESBLs-SA的電導率、堿性磷酸酶(AKP)、胞外蛋白含量及SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化的研究。

2、
　　 第一章：中藥抑菌機制方法研究進展
　　 本章通過對中藥抑菌機制方法有關(guān)文獻的檢索，綜述了中藥抑菌機制方法的研究進展。
　　 第二章：丹參、補骨脂生品及炮制品的體外抗菌活性研究
　　 采用紙片擴散法(K-B法)測定了丹參生品及炮制品的抑菌圈和最低抑菌濃度(MIC)，液體培養(yǎng)法測定了半數(shù)抑菌濃度(IC50值)。
　　 抑菌圈顯示，炒丹參和酒丹參的抑菌活性較對應的生品活性增強，而丹參炭的抑菌活性

3、明顯減弱，但仍具有一定的抑菌活性；其中炒丹參的甲醇總提取物濃度在50mg/mL時對SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌圈直徑最大，均為20mm。MIC值顯示，丹參生品及炮制品的體外抗菌活性是：甲醇總提取物>石油醚和乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物，說明丹參抗菌作用的活性成分主要存在于極性較小的石油醚部位和乙酸乙酯部位。IC50值顯示，對SA，炒丹參(乙酸乙酯部位，IC50=0.26mg/mL)的抑菌活性最好；對MRSA，炒丹參(乙酸乙酯部

4、位，IC50=0.13mg/mL)的抑菌活性最好；對ESBLs-SA，丹參生品(石油醚部位，IC50=0.31mg/mL)和炒丹參(石油醚部位，IC50=0.31mg/mL)的抑菌活性最好。
　　 綜上證明丹參生品及不同炮制品對SA、MRSA和ESBLs-SA的抑制作用明顯，不同炮制方法對丹參的抗菌作用產(chǎn)生了影響。
　　 采用K-B法測定了補骨脂生品及炮制品的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測定了IC50值。
　　

5、抑菌圈顯示，酒炙補骨脂的甲醇總提取物和石油醚部位在濃度為50mg/mL時對SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌圈均為12mm，活性最好；補骨脂甲醇總提取物和石油醚部位的活性明顯好于乙酸乙酯部位和正丁醇部位的活性，經(jīng)炮制后乙酸乙酯部位和正丁醇部位均較生品的抗菌活性增加。MIC值顯示，石油醚部位是補骨脂生品主要的抑菌活性部位，對SA、MRSA、ESBLs-SA的MIC值均為31.3μg/disc。IC50值顯示，對SA，酒炙補骨脂(石油醚

6、部位，IC50=0.10mg/ml)的抑制活性最好；對MRSA，補骨脂生品(甲醇總提取物，IC50=0.16mg/ml)的抑制活性最好；對ESBLs-SA，鹽蒸補骨脂(甲醇總提取物，IC50=0.28mg/ml)的抑制活性最好。
　　 綜上所述，補骨脂生品和炮制后的補骨脂對SA、MRSA、ESBLs-SA的抑制作用明顯，尤其是酒炙補骨脂抑菌活性增強的較顯著，不同炮制方法對補骨脂的抗菌作用產(chǎn)生了影響。
　　 第三章：隱丹參

7、酮和二氫丹參酮Ⅰ的抑菌機制研究
　　 采用K-B法測定了隱丹參酮的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測定了IC50值。抑菌圈顯示，隱丹參酮對SA的抑制作用略強于MRSA和ESBLs-SA，隱丹參酮在濃度為5mg/mL時對SA的抑菌圈(15mm)大于對MRSA和ESBLs-SA的抑菌圈(13mm)；MIC值顯示，隱丹參酮對SA的活性最好(MIC=0.078mg/mL；IC50值顯示，隱丹參酮對SA的活性最好(IC50=0.092±0.0

8、3.mg/mL)。
　　 通過測定電導率變化、堿性磷酸酶(AKP)的含量變化、胞外蛋白含量變化和SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化，研究了隱丹參酮對SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌機制。
　　 抑菌機制研究結(jié)果顯示經(jīng)隱丹參酮作用后，SA、MRSA、ESBLs-SA的電導率、AKP及可溶性蛋白含量均增大，SDS-PAGE電泳顯示蛋白譜帶也明顯發(fā)生變化。說明隱丹參酮可能破壞了細菌細胞壁和細胞膜的結(jié)構(gòu)，導致細胞膜通透性增加

9、，進而使細胞內(nèi)容物外泄；同時推測隱丹參酮對細菌蛋白質(zhì)的合成有一定影響，使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)減少，影響和阻礙細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達，最終導致細菌正常生理功能受損或喪失。
　　 采用K-B法測定了二氫丹參酮Ⅰ的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測定了IC50值。抑菌圈顯示，二氫丹參酮Ⅰ在濃度為5mg/mL對SA的抑菌圈(12mm)大于對MRSA和ESBLS-SA的抑菌圈(10mm)；MIC值顯示，對SA的活性最好(MIC=0.078mg/mL)；I

10、C50值顯示，對SA、MRSA、ESBLS-SA的活性順序：SA(IC50=0.243±0.01mg/mL)>ESBLs-SA(IC50=0.280±0.00mg/mL)>MRSA(IC50=0.539±0.03mg/mL)。
　　 通過測定電導率變化、堿性磷酸酶(AKP)的含量變化、胞外蛋白含量變化和SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化，研究了二氫丹參酮Ⅰ對SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌機制。
　　 抑菌機制研究結(jié)