丹參酮ⅡA對AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：探丹參酮ⅡA(TSN)對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響，以尋找藥物作用的靶點(diǎn)。
　　 方法：分離大鼠胸主動脈中層平滑肌，貼壁法培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，建立AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖模型；以四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法觀察丹參酮ⅡA對VSMC增殖的影響；流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞周期的影響；用酶促反應(yīng)定磷法測定鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)觀察CaN

2、mRNA表達(dá)水平的變化和應(yīng)用Western blot檢測PCNA蛋白表達(dá)水平的變化；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察原癌基因c-fos和c-myc表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：(1)成功建立AngⅡ誘導(dǎo)的VSMC增殖模型；(2)AngⅡ誘導(dǎo)增殖組的VSMC增殖活性較未處理對照組VSMC增殖活性明顯增強(qiáng)(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后VSMC增殖活性較AngⅡ誘導(dǎo)增殖的VSMC組明顯下降(P<0.01)，且隨著丹參酮ⅡA濃度增加VSMC

3、增殖活性呈明顯下降趨勢(P<0.05,P<0.01)；(3)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：AngⅡ誘導(dǎo)增殖組較未處理對照組VSMC G0/G1期比例明顯下降(P<0.01)，S期比例明顯升高(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后VSMC G0/G1期比例明顯升高(P<0.01)，而S期比例明顯下降(P<0.01)，且隨著丹參酮ⅡA濃度增加使VSMC G0/G1期比例呈升高趨勢(P<0.01，P<0.01),S期比例呈下降趨勢(P<0.01，P<0.0

4、1);(4) AngⅡ誘導(dǎo)增殖組較未處理對照組VSMC中CaN活性明顯增強(qiáng)(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后VSMC中CaN活性顯著下降(P<0.01)，且隨著丹參酮ⅡA濃度增加VSMC中CaN活性呈下降趨勢(P<0.01，P<0.01)；(5) AngⅡ誘導(dǎo)增殖組較未處理對照組VSMC中CaN mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后VSMC中CaN mRNA表達(dá)明顯下降(P<0.01)，且隨著丹參酮ⅡA濃度增加VSMC

5、中CaN mRNA表達(dá)呈下降趨勢(P<0.01，P<0.01)；(6) AngⅡ誘導(dǎo)增殖組較未處理對照組VSMC中PCNA蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后VSMC中PCNA蛋白表達(dá)明顯下降(P<0.01)，且隨著丹參酮ⅡA濃度增加VSMC中PCNA蛋白表達(dá)水平呈下降趨勢(P＜0.05，P＜0.01);(7) AngⅡ誘導(dǎo)增殖組較未處理對照組VSMC中c-fos和c-myc表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01)，丹參酮ⅡA處理后V