α-硫辛酸對(duì)線粒體氧化應(yīng)激介導(dǎo)的糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的： 1.動(dòng)態(tài)觀察糖尿病大鼠心肌細(xì)胞的凋亡，探討心肌細(xì)胞凋亡在糖尿病心肌病中的作用。 2.探討糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡是否通過激活線粒體細(xì)胞色素c(Cyt c)-半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡通路而誘發(fā)。 3.探討抗氧化劑α-硫辛酸(α-LA)能否減弱高糖狀態(tài)下線粒體的氧化應(yīng)激損傷，減少線粒體依賴的心肌細(xì)胞凋亡，預(yù)防糖尿病心肌病。 方法： 1.一次性尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)(45m

2、g/kg體重)制備糖尿病大鼠模型。 2.將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三組：正常對(duì)照組、糖尿病組、糖尿病α-LA干預(yù)組(硫辛酸組)，每組又分三個(gè)階段處死(4周、8周、12周)。硫辛酸組即糖尿病大鼠模型成功后每天腹腔注射α-LA(100 mg/kg體重)。 3.每次處死動(dòng)物前在麻醉狀態(tài)下頸動(dòng)脈插管測(cè)量大鼠主動(dòng)脈收縮血壓(SBP)和舒張壓(DBP)、左室收縮末壓(LVSP)和舒張術(shù)壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓力的最大上升和下降速率(±dp/d

3、tmax)。 4.HE、MASSON染色觀察各組大鼠的病理變化。 5.差速離心法提取心肌組織的線粒體，應(yīng)用TBA法測(cè)量線粒體中丙二醛(MDA)含量，比色法測(cè)量線粒體中錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量。 6.利用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(SQ-RT-PCR)、免疫組化技術(shù)測(cè)量心肌組織中半胱天冬酶-3、9 mRNA表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。western印跡技術(shù)分別檢測(cè)線粒體、細(xì)