褪黑素對糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：糖尿病心肌病是在糖尿病患者尤其是2型糖尿病患者的基礎(chǔ)上發(fā)病的，且具有病情重、預(yù)后差和病死率高的特點(diǎn)。為尋求有效的治療方法，現(xiàn)本文就褪黑素（MLT）對長期患2型糖尿?。═2DM）大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其可能的機(jī)制進(jìn)行研究和探討。
　　方法：（1）T2DM大鼠模型：在使用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)一周后，36只SPF級健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對照組(Control，n=12)，模型組(DM，n=12)，治療組(DM+MLT，n=12)。采用

2、高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)25 mg/kg的方法誘導(dǎo)2型糖尿病模型。造模成功后，治療組給予MLT(10 mg/(kg·d))灌胃治療。24周后，動脈插管檢測大鼠心功能；收集大鼠腹主動脈血和心肌組織，并檢測大鼠空腹血糖（FBG），血脂(TC、LDL-c、TG)和胰島素水平；HE染色和Masson染色分別觀察大鼠心肌的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化和膠原纖維的堆積情況；原位末端標(biāo)記法（TUNEL）觀察心肌組織細(xì)胞凋亡；免疫組化（IHC）檢測

3、Caspase-3的表達(dá)水平。此外，為探討其可能的分子機(jī)制，Western blot法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（GRP78, CHOP, PERK, ATF-6α, IRE1α, Caspase-12）,絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相關(guān)蛋白(JNK, p38, ERK)和凋亡相關(guān)蛋白（Caspase-9, Caspase-3, Bcl-2, Bax）的表達(dá)情況。（2）高糖培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞H9C2為細(xì)胞模型：不同糖濃度培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞4

4、8 h后，Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡，western blot檢測MAPK通路相關(guān)蛋白JNK、p38和 ERK的磷酸化水平。
　　結(jié)果：（1）T2DM大鼠模型：模型組大鼠的FBG為(19.27±1.03) mmol/L，胰島素水平為（34.79±7.97μIU/mL），均顯著高于對照組大鼠，且胰島素敏感性指數(shù)(lnISI)為-6.48±0.23明顯比對照組大鼠低，表明存在胰島素抵抗(IR)。這些結(jié)果都說明已成功構(gòu)建T

5、2DM大鼠模型。MLT不僅能降低FBG和血脂（TC、LDL-c、TG）水平，還能增強(qiáng)胰島素的敏感性。HE染色結(jié)果提示MLT能改善心肌組織形態(tài)的紊亂情況，Masson染色結(jié)果表明MLT能減少心肌組織膠原纖維的堆積。模型組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡細(xì)胞明顯增多，且心功能嚴(yán)重受損，經(jīng)MLT治療后均明顯改善。IHC顯示MLT能降低T2DM大鼠Caspase-3的表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示模型組大鼠心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHO

6、P、PERK、ATF-6α、IRE1α和Caspase-12的表達(dá)均明顯上升，且JNK的磷酸化水平也明顯上調(diào)。T2DM大鼠經(jīng)MLT治療后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)和JNK的磷酸化水平均下調(diào)。（2）高糖培養(yǎng)H9C2細(xì)胞模型：Hoechst33258染色顯示高糖能誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞凋亡；Western blot結(jié)果顯示高糖能上調(diào)H9C2細(xì)胞中JNK的磷酸化水平，并具有一定的濃度依賴性。
　　結(jié)論：T2DM大鼠心肌細(xì)胞凋亡增多，其機(jī)制可能是