PI3K-AKT信號通路在葛根素預(yù)處理抑制大鼠缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：觀察葛根素(Puerarin,Pue)預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用并探討Pue預(yù)處理對缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響以及與P13K/Akt信號通路的相關(guān)性。
　　 方法：健康雄性SD大鼠40只隨機(jī)分為5組(n=8):假手術(shù)組(SH組)；缺血再灌注組(IR組)；葛根素預(yù)處理組(PU組)；葛根素預(yù)處+LY294002組(PU+LY組)；缺血再灌注+LY294002組(IR+LY組)。采用結(jié)扎冠狀動脈左前降支(left a

2、nterior descending coronary artery,LAD)30min,再灌注120min的方法復(fù)制大鼠心肌缺血再灌注實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?1)SH組:開胸,在LAD下穿線但不結(jié)扎,在穿線前15 min經(jīng)左頸靜脈緩慢注射生理鹽水(2.5 ml/kg),連續(xù)觀察150 min。(2)IR組:在結(jié)扎前15min經(jīng)左頸靜脈緩慢注射生理鹽水(2.5ml/kg),缺血30min,再灌注120min。(3)PU組:缺血前15min經(jīng)左頸靜脈

3、緩慢注射Pue(2.5ml/kg),余同IR組。(4)PU+LY組:給葛根素前15min經(jīng)左頸靜脈緩慢注射P13K/Akt信號通路阻斷LY29400(0.3 mg/kg),余同PU組。(5)IR+LY組:缺血前15min經(jīng)左頸靜脈緩慢注射LY29400(0.3 mg/kg),余同IR組。于缺血前、缺血30min以及再灌注60、90、120min時,測定左心室收縮壓(Left ventricularsystolic pressure,LV

4、SP)、左心室舒張末期壓(Left ventricularend.diastolic pressure,LVEDP)、左室內(nèi)壓力變化最大上升和下降速率(Maximum rates of left ventricular pressure development and decay,±dp/dtmax)；化學(xué)比色法測定動脈血清一氧化氮(Nitric oxide,NO)和一氧化氮合酶(Nitric-oxide synthase,NOS)的含

5、量；Western blot測定心肌組織P-Akt信號蛋白的表達(dá)；TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡程度。
　　 結(jié)果：⑴缺血前各組血流動力學(xué)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與SH組比較,其余各組各時點(diǎn)LVSP和+dp/dtmax呈進(jìn)行性下降,LVEDP和-dp/dtmax呈進(jìn)行性升高(P<0.05)。與IR組比較,PU組各時間點(diǎn)LVSP、+dp/dtmax升高,LVEDP、-dp/dtmax降低(P<0.05),PU+LY組和

6、IR+LY組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與PU組比較,PU+LY組和IR+LY組各時間點(diǎn)的LVSP、+dp/dtmax明顯降低(P<0.05),LVEDP、-dp/dtmax明顯升高(P<0.05)。結(jié)果表明葛根素預(yù)處理具有保護(hù)缺血再灌注損傷時心肌的收縮和舒張功能。⑵與IR組比較,PU組NO和NOS的含量明顯增加(P<0.05)；PU+LY組和IR+LY組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與PU組比較,PU+LY組和IR+LY組N

7、O和NOS的含量明顯降低(P<0.05)。表明葛根素預(yù)處理可以增加NO和NOS的表達(dá),而這種作用被P13K/Akt信號通路的阻斷劑LY294002所阻斷。⑶與SH組比較,其余四組心肌細(xì)胞凋亡明顯增加(P<.05)。與IR組比較,PU組心肌細(xì)胞凋亡降低(P

8、2消除葛根素抗心肌細(xì)胞凋亡的作用,表明葛根素抑制細(xì)胞凋亡的作用可能與P13K/AKt信號通路有關(guān)。⑷與SH組比較,IR組和PU組心肌組織p-Akt蛋白表達(dá)增加(P