人參皂苷Rg1對(duì)H-,2-O-,2-和Aβ-,25-35-誘導(dǎo)的ALZHEIMER細(xì)胞模型作用的研究.pdf

1、人們普遍認(rèn)為，阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，主要病理學(xué)特征是神經(jīng)元纖維纏結(jié)、老年斑產(chǎn)生和神經(jīng)元丟失。Mlzheimer病(AD)患者腦中β-淀粉樣肽(AB)的異常增加與沉積是啟動(dòng)AD神經(jīng)退變不可逆病理發(fā)展過(guò)程的核心事件。而我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥復(fù)古方——開(kāi)心散是許多益智類古方中常用的組成之一，經(jīng)古人的長(zhǎng)期臨床實(shí)踐，證實(shí)有良好的益智作用。目前，關(guān)于開(kāi)心散作用于AD模型的研究較

2、多，但有關(guān)開(kāi)心散中的某一活性組分作用于AD的研究報(bào)道較少。本研究利用H<,2>O<,2>和AB<,25-35>致SK-N-SH細(xì)胞凋亡，制備具有擬AD樣病理變化的細(xì)胞模型，研究開(kāi)心散的活性組分之一是人參皂苷Rgl對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用，并探討其分子機(jī)制，為研究篩選對(duì)Alzheimer病(AD)等神經(jīng)退行性疾病有治療作用的傳統(tǒng)藥物尋求實(shí)驗(yàn)證據(jù)(更好的治療途徑)。 文中采用了以下研究方法：1.制備含人參皂苷Rgl有效藥物濃度的

3、培養(yǎng)基。2.AD細(xì)胞模型的制備：MTT法測(cè)細(xì)胞存活率，確定適當(dāng)損傷細(xì)胞最佳造模條件(AB<,25-35>20 μM作用24小時(shí)，H<,2>O<,2>100μmol/L作用12小時(shí))。3.各種指標(biāo)的檢測(cè)：MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；DNAladder觀察凋亡細(xì)胞的DNA片段化；化學(xué)比色法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性；RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞淀粉樣肽蛋白前體(APP)基因、

4、中性內(nèi)肽酶(NEP)基因的表達(dá)情況以及細(xì)胞bcl-2、baX的表達(dá)水平；Western Blot檢測(cè)細(xì)胞APP和NEP蛋白的表達(dá)情況。 研究結(jié)果表明：100μmol/LH<,2>O<,2>誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞12h，細(xì)胞活力下降(均P<0.01)，細(xì)胞凋亡率為16.3﹪，DNA斷裂呈片段狀，細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞內(nèi)MDA含量增加，SOD活性下降，細(xì)胞中bax表達(dá)明顯升高。20 μ mol/L Aβ<,25-35>誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)

5、胞24h，細(xì)胞活力下降(均P<0.01)，細(xì)胞凋亡率為33.9﹪，DNA斷裂呈片段狀，細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞內(nèi)MDA含量增加，SOD活性降低。而人參皂苷Rg1能提高細(xì)胞的存活率，減少細(xì)胞損傷，使細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞內(nèi)MDA含量將低，SOD活性提高(P<0.01)，RT-PCR結(jié)果顯示人參皂苷Rg1可降低bax、APP基因的表達(dá)并提高NEP基因的表達(dá)，同時(shí)Western Blot結(jié)果顯示人參皂苷Rg1可降低APP蛋白的表達(dá)并提高NEP蛋白的表達(dá)。得