睪丸酮對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是老年人群中高發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確,目前認(rèn)為伴隨著衰老的體內(nèi)性激素水平下降是導(dǎo)致AD發(fā)病的重要病因之一。進(jìn)一步闡明體內(nèi)性激素在AD發(fā)病中的作用對于AD發(fā)病機(jī)制的研究和AD的臨床防治有重要意義。本課題從細(xì)胞活性、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)與凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平四個(gè)方面觀察睪丸酮對體外培養(yǎng)的嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)細(xì)胞凋亡活動的影響,為進(jìn)一步研究AD的發(fā)病

2、機(jī)制和臨床治療提供理論依據(jù)。本課題主要包括三個(gè)部分:第一部分:睪丸酮對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡后細(xì)胞活性的影響采用MTT分析法檢測睪丸酮對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡活性的影響。預(yù)先以含不同終濃度Aβ25-35的培液孵育PC12細(xì)胞24小時(shí)后,PC12細(xì)胞活性明顯下降,且下降程度與Aβ25-35濃度相關(guān),其IC50大約在20μM左右;進(jìn)一步我們以含不同濃度睪丸酮的培液預(yù)保護(hù)12小時(shí),再以20μMAβ25-35誘導(dǎo)PC12

3、細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示PC12細(xì)胞活性下降受到明顯抑制,在一定范圍內(nèi)隨睪丸酮濃度增加作用增強(qiáng),其IC50大約在50μM左右;在含睪丸酮培液中加入100μM的氟他胺后,再以20μMAβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡,睪丸酮對PC12細(xì)胞保護(hù)作用受到明顯抑制。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推斷睪丸酮可以明顯抑制Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡后細(xì)胞活性下降,其作用途徑可能受雄激素受體所介導(dǎo)。第二部分:睪丸酮對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)影響采

4、用Hochest-PI雙染色法觀察睪丸酮對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響,本實(shí)驗(yàn)中我們設(shè)置四個(gè)處理組:①正常對照組;②睪丸酮預(yù)保護(hù)組;③Aβ25-35處理組;④氟他胺處理組。Hochest-PI雙染色后發(fā)現(xiàn)Aβ25-35處理組凋亡PC12細(xì)胞數(shù)量顯著增加,而睪丸酮保護(hù)后凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯減少,預(yù)先予以氟他胺干預(yù)后,睪丸酮作用受到明顯抑制。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果從形態(tài)學(xué)上進(jìn)一步證實(shí)睪丸酮可以抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋

5、亡活動,第三部分:睪丸酮對PC12細(xì)胞凋亡相關(guān)調(diào)控因子Bcl-xl、Bax表達(dá)的影響本部分包括實(shí)驗(yàn)三和實(shí)驗(yàn)四,每次實(shí)驗(yàn)各設(shè)4個(gè)處理組:①正常對照組;②睪丸酮預(yù)保護(hù)組;③Aβ25-35處理組;④氟他胺處理組。實(shí)驗(yàn)三采用Western-blot免疫印跡法檢測各實(shí)驗(yàn)組Bcl-xl、Bax的蛋白表達(dá),實(shí)驗(yàn)四采用Real-timePCR檢測各實(shí)驗(yàn)組Bax、Bcl-xlmRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Aβ25-35處理組PC12細(xì)胞Bax蛋白及Baxm

6、RNA表達(dá)均明顯上調(diào)、Bcl-xl蛋白及Bcl-x1mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05);睪丸酮保護(hù)后PC12細(xì)胞Bax蛋白及BaxmRNA表達(dá)均明顯下調(diào)、Bcl-xl蛋白及Bcl-xlmRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01);予以氟他胺干預(yù)后與睪丸酮保護(hù)組相比Bcl-xl蛋白及Bcl-xlmRNA的表達(dá)明顯下降、Bax蛋白及BaxmRNA的表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)。因此結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們推斷,睪丸酮抗細(xì)胞凋亡作用可能與上調(diào)Bcl-x