雷帕霉素在輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷中的保護作用.pdf

1、目的：
　　探討雷帕霉素（Rapamycin，Rap）預處理對電離輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷是否有保護作用。
　　方法：
　?。?）將C57BL/6小鼠分為未輻射組和輻射處理組，每組又分對照組和雷帕霉素預處理組。輻射組小鼠接受60Coγ射線5 Gy輻射，雷帕霉素預處理組小鼠輻射處理前腹腔注射雷帕霉素4 mg/kg，隔天注射一次，共五次。取未輻射組和輻射各處理組小鼠外周血，通過全血分析儀檢測各時間段（第0.5，1，2，3

2、，5，7，15，30，40，70，100天）小鼠外周血白細胞（WBC），淋巴細胞（LYM），紅細胞（RBC），血小板（PLT）和血紅蛋白（HGB）的變化，分析輻射處理和雷帕霉素處理對外周血各指標的影響，并分析輻射后外周血各指標變化趨勢。
　?。?）取未輻射組和輻射后第6和12小時的小鼠股骨和脛骨骨髓單個核細胞，通過流式細胞分析儀和Western Blotting檢測對照組和雷帕霉素處理組單個核細胞損傷標志蛋白γ-H2AX聚集，并通

3、過Western Blotting檢測損傷修復途徑-同源末端修復（HR）和非同源末端連接修復（NHEJ）關(guān)鍵蛋白Rad50和DNA Lig4表達量的變化。
　?。?）取輻射處理后30天的骨髓細胞，低滲處理獲得染色體，分析對照組和雷帕霉素處理組細胞染色體形態(tài)變化。
　?。?）取未輻射和輻射后（第1，5，15，30天）的對照組和雷帕霉素處理組小鼠胸骨，HE染色觀察骨髓腔內(nèi)的有核細胞分布及有核細胞與成熟紅細胞比例，血管結(jié)構(gòu)的變化。

4、
　?。?）取輻射后第15天的對照組和雷帕霉素組小鼠肝組織，HE染色觀察肝結(jié)構(gòu)的變化，并取脾臟，用 Tellyesniczky固定液處理觀察全脾臟表面結(jié)節(jié)數(shù)，分析內(nèi)源性集落生成能力差異。
　?。?）取5 Gy輻射后4小時內(nèi)的對照組和雷帕霉素組小鼠骨髓細胞，尾靜脈注射至10 Gy致死劑量照射處理的受體小鼠，分析中位生存時間差異。
　?。?）將對照組和不同濃度雷帕霉素（1mg/Kg，4 mg/Kg，8 mg/Kg）預處理組

5、小鼠8.5 Gy劑量輻射處理后，比較30天內(nèi)小鼠中位生存時間差異。
　　結(jié)果：
　　（1）未輻射組：雷帕霉素處理組小鼠外周血白細胞及淋巴細胞數(shù)降低，紅細胞及血紅蛋白升高，血小板無變化。輻射組：雷帕霉素預處理組，短期內(nèi)可以減緩輻射誘發(fā)的小鼠外周血紅細胞、血小板下降，增強白細胞輻射后的長期恢復。
　?。?）未輻射組：雷帕霉素處理和對照組損傷標志蛋白γ-H2AX不表達，同時對損傷修復蛋白Rad50和DNA Lig4的表達無影

6、響。輻射后：雷帕霉素預處理組損傷標志蛋白γ-H2AX水平降低，輻射后6 h組雷帕霉素預處理組損傷修復蛋白Rad50和 DNA Lig4水平升高。
　?。?）輻射處理后30天，對照組小鼠骨髓細胞染色體形態(tài)觀察到染色體異?，F(xiàn)象（染色體斷裂和染色體間隙），而雷帕霉素處理組無染色體異常出現(xiàn)。
　　（4）輻射前和輻射后不同時間段小鼠胸骨HE染色發(fā)現(xiàn)，未輻射組，雷帕霉素處理不影響有核細胞與成熟紅細胞比例，靜脈結(jié)構(gòu)完整，紅細胞有序分布靜脈

7、竇內(nèi)；輻射處理后，對照組和雷帕霉素處理組在輻射后短期內(nèi)均出現(xiàn)有核細胞減少，紅細胞增多，靜脈結(jié)構(gòu)消失，紅細胞紊亂分布，輻射后15天開始，有核細胞逐漸恢復，紅細胞減少，靜脈結(jié)構(gòu)重現(xiàn)，但在對照組有核細胞恢復速度明顯慢于雷帕霉素處理組，并且對照組出現(xiàn)紅細胞惡性增殖的現(xiàn)象。
　　（5）未輻射組，雷帕霉素處理不影響肝組織的結(jié)構(gòu)；輻射處理后第15天，對照組小鼠出現(xiàn)明顯的肝細胞水腫現(xiàn)象，而雷帕霉素處理組肝細胞水腫程度明顯輕于對照組；對第15天的脾

8、臟表面集落計數(shù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素處理組脾集落明顯高于對照組。
　?。?）將輻射后對照組和雷帕霉素處理組的小鼠骨髓細胞對致死劑量輻射小鼠立即進行骨髓移植，觀察小鼠存活時間，結(jié)果表明，雷帕霉素預處理可一定程度延緩致死劑量輻射小鼠的死亡時間。
　?。?）對照組與不同濃度雷帕霉素處理組小鼠30天存活曲線表明，當腹腔注射濃度為4mg/Kg時，能延緩致死劑量照射引起的小鼠死亡。
　　結(jié)論：
　?。?）輻射前雷帕霉素預處理可以