雷帕霉素對TGF-β1誘導(dǎo)的人Treg細(xì)胞的體外影響.pdf

1、目的:探討雷帕霉素對TGF-β1誘導(dǎo)分化的人CD4+CD25+Treg細(xì)胞表型及功能的影響,尋找調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)紊亂以治療相關(guān)疾病的新方法。
　　 方法:使用免疫磁珠分選方法從正常健康人外周血中分離CD4+CD25-T細(xì)胞(純度＞85％)和CD4+CD25+Treg細(xì)胞(純度＞95％)。將CD4+CD25-T細(xì)胞分為TGF-β1組(不加Rapa),對照組、TGF-β1+Rapa組,在培養(yǎng)第5d添加不同濃度Rapa(梯度為10ng/m

2、l、50ng/mL、100ng/ml、200ng/ml)至后兩組,第7d向三組中添加100ng/ml IL-2。在培養(yǎng)的第5、7、10、14和21d,分別用流式檢測細(xì)胞中iTreg細(xì)胞比例,MTT法檢測iTreg細(xì)胞抑制功能及ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-10的濃度。
　　 結(jié)果:本實驗條件下,①100ng/ml為Rapa的最佳刺激濃度,對TGF-β1誘導(dǎo)的CD4+CD25+iTreg細(xì)胞的增殖作用最為顯著,作

3、用呈時間依賴關(guān)系,刺激培養(yǎng)時間越長,CD4+CD25+iTreg細(xì)胞比例越高,刺激培養(yǎng)21d細(xì)胞擴(kuò)增效果最明顯。經(jīng)過5d、7d、10d、14d和21d刺激培養(yǎng)后,流式檢測TGF-β1組和TGF-β1+Rapa組中CD4+CD25+iTreg細(xì)胞比例分別為[(24.57±0.85)％,(27.47±1.06)％,(30.09±2.86)％,(34.02±1.63)％,(32.50±0.81)％]和[(24.57±0.85)％,(40.87

4、±1.35)％,(50.52±1.18)％,(62.60±2.00)％,(82.31±1.56)％],與對照組[(4.36±0.07)％(4.49±0.12)％,(5.36±0.13)％,(5.68±0.18)％,(5.88±0.07)％]相比均明顯升高而前兩組相比,TGF-β1+Rapa組iTreg細(xì)胞百分比明顯高于TGF-β1組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Ps＜0.05,Ps＜0.05);②培養(yǎng)第21d,MTT法分別檢測TGF-β1和TG

5、F-β1+Rapa組iTreg細(xì)胞的抑制增殖能力,測得OD值[(0.37±0.08)和(0.20±0.06)]與對照組(0.53±0.10)相比降低(Ps＜0.05),且TGF-β1+Rapa組OD值也低于TGF-β組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Ps＜0.05);③在培養(yǎng)第21d,TGF-β1和TGF-β1+Rapa兩組細(xì)胞上清液中IL-10[(202.30±7.56)pg/ml和(420.17±13.74)pg/ml]水平均增高,而IL-4

6、[(44.62±1.21)pg/ml和(15.21±1.14)pg/ml]水平均降低,與對照組[(87.15±3.58)pg/ml和(88.48±1.58)pg/ml]相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Ps＜0.05)。
　　 結(jié)論:本實驗條件下①Rapa可擴(kuò)增TGF-β1誘導(dǎo)生成的Treg細(xì)胞,維持表型穩(wěn)定長達(dá)三周,但不能誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iTreg細(xì)胞;②Rapa擴(kuò)增的TGF-β1誘導(dǎo)的iTreg細(xì)胞具有免疫抑制功能,其