雷帕霉素對蛋白負(fù)荷腎病大鼠模型腎臟的影響.pdf

1、目的：觀察雷帕霉素對蛋白負(fù)荷腎病大鼠模型腎臟的影響及氯沙坦能否對其有保護(hù)作用，并探討相關(guān)機制。 方法：清潔級雌性Wistar大鼠36只隨機分為空白對照組、模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組。采用向大鼠腹腔注射牛血清白蛋白(BSA)制備蛋白負(fù)荷腎病大鼠模型；雷帕霉素組：在模型大鼠基礎(chǔ)上給予雷帕霉素；聯(lián)合用藥組：在模型大鼠基礎(chǔ)上給予雷帕霉素和氯沙坦。檢測各組大鼠的血、尿指標(biāo)變化，SDS-PAGE電泳分析大鼠尿蛋白成分，同時在光鏡、電鏡下

2、觀察腎組織的病理改變，采用免疫組化、RT-PCR法檢測腎小球足細(xì)胞損傷標(biāo)志物-desmin蛋白以及TGF-β1的表達(dá)。 結(jié)果： 1.尿液指標(biāo)觀察： 1.1各組大鼠尿蛋白定量：實驗第7天，模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠均出現(xiàn)明顯蛋白尿。雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠24小時尿蛋白量均較模型組大鼠顯著增多(P＜0.05)，但聯(lián)合用藥組大鼠24小時尿蛋白量較雷帕霉素組有明顯緩解(P＜0.05)。實驗第14天，雷帕霉素組

3、大鼠24小時尿蛋白量仍明顯高于模型組(P＜0.05)，而聯(lián)合用藥組與模型組大鼠之間的24小時尿蛋白量無明顯差異(P＞0.05)。 1.2SDS-PAGE電泳分析結(jié)果顯示：收集實驗第7天的尿液進(jìn)行電泳分析：雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠的大量尿蛋白均以中分子蛋白為主。 2.血生化指標(biāo)觀察：實驗第8天，各組大鼠的腎功能(血肌酐和血尿素氮)未見明顯差異(P＞0.05)。實驗第15天，雷帕霉素組大鼠的血尿素氮水平顯著高于模型組(P＜

4、0.05)，而聯(lián)合用藥組大鼠的血尿素氮水平較雷帕霉素組降低(P＜0.05)。 3.腎臟組織病理改變： 3.1HE染色：各組大鼠腎小球均未見明顯病理改變，應(yīng)用雷帕霉素后大鼠腎小管上皮細(xì)胞空泡變形多見，刷狀緣脫落多見，腎小管管腔中出現(xiàn)大量蛋白管型，并且較模型組明顯增多。聯(lián)合用藥組大鼠腎小管管腔中蛋白管型較雷帕霉素組大鼠減少。 3.2電鏡：模型組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)基本完整，無增厚，偶見足突局灶性融合。雷帕霉素

5、的腎小球足突融合多見，足細(xì)胞內(nèi)可見較多電子致密物。聯(lián)合用藥組大鼠電鏡下足細(xì)胞改變與雷帕霉素組大鼠相似。 4.免疫組化檢測Oesmin、TGF-β1蛋白表達(dá)： 4.1Desmin蛋白：雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球desmin蛋白表達(dá)均明顯高于模型組大鼠(P＜0.05)，雖聯(lián)合用藥組大鼠desmin陽性表達(dá)較雷帕霉素組有不同程度地減少，但OD值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 4.2TGF-β1蛋白：雷帕霉素組

6、和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球TGF-β1蛋白表達(dá)均明顯高于模型組(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組較雷帕霉素組TGF-β1蛋白的表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 5.RT-PCR檢測TGF-β1mRNA表達(dá)：雷帕霉素組大鼠皮質(zhì)區(qū)TGF-β1mRNA表達(dá)較模型組明顯增加，差異有顯著性(P＜0.05)。聯(lián)合用藥組TGF-β1表達(dá)較雷帕霉素組減少(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組與模型組大鼠間TGF-β1mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)差異。并且各