低劑量雷帕霉素對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞nephrin及podocin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)觀察低劑量雷帕霉素（rapamycin，簡(jiǎn)稱RAPA）對(duì)糖尿病腎病大鼠血糖、內(nèi)生肌酐清除率、腎重體重比、腎臟病理，以及nephrin和podocin兩種足細(xì)胞特異的蛋白分子表達(dá)的影響，探討糖尿病腎病蛋白尿的發(fā)病機(jī)制，觀察低劑量雷帕霉素能否通過(guò)減輕足細(xì)胞的損傷而延緩糖尿病大鼠的腎臟損害。
　　 方法：選取24只SD雄性大鼠，體重200-250g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（C組，n=8）,糖尿病組（n=16）。糖尿病組大鼠禁食

2、12小時(shí)后按75mg/kg體重給予1％鏈脲佐菌素（STZ）一次性腹腔內(nèi)注射，正常組大鼠給予等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔內(nèi)注射。注射后72小時(shí)尾靜脈取血測(cè)血糖，以血糖≥16.7mmol/L為造模成功。造模后第7、14、28天再次測(cè)血糖，仍符合上述標(biāo)準(zhǔn)者為穩(wěn)定成模的大鼠，進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不符合者退出實(shí)驗(yàn)。將穩(wěn)定成模的糖尿病組大鼠按體重隨機(jī)分為兩組：糖尿病腎病未治療組（DN未治療組，n=8），糖尿病雷帕霉素干預(yù)組（DN+RAPA組，n=8）

3、。從造模后第五周起DN+RAPA組大鼠每日按1mg/Kg體重給予0.3％雷帕霉素溶液灌胃給藥，C組和DN未治療組以相同體積0.5％羧甲基纖維素溶液灌胃，共干預(yù)8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)各組大鼠血糖、24小時(shí)尿蛋白、體重校正的內(nèi)生肌酐清除率、腎重體重比的變化；HE及PASM染色觀察各組大鼠腎臟的病理改變，透射電鏡觀察腎小球的超微結(jié)構(gòu)改變；通過(guò)免疫組化二步法觀察nephrin及podocin在腎組織的定位和表達(dá)，并應(yīng)用圖像軟件分析系統(tǒng)對(duì)二者的表達(dá)

4、進(jìn)行半定量測(cè)定；通過(guò)RT-PCR方法半定量分析nephrin和podocin mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，DN未治療組大鼠血糖明顯增高，體重校正的內(nèi)生肌酐清除率、24小時(shí)尿蛋白量及腎重體重比均顯著增加（P<0.01），腎臟體積明顯增大，透射電鏡下可見(jiàn)腎小球足細(xì)胞足突增寬、部分融合，基底膜節(jié)段性增厚，通過(guò)半定量分析提示足細(xì)胞nephrin和podocin的蛋白及 mRNA表達(dá)均明顯下調(diào)（P<0.01）；DN

5、+RAPA組體重校正的內(nèi)生肌酐清除率及24小時(shí)尿蛋白量較DN未治療組明顯降低（P<0.01），HE和PASM染色顯示腎小球肥大、系膜基質(zhì)增生程度較DN未治療組明顯減輕，電鏡下觀察足突增寬、融合現(xiàn)象及基底膜增厚程度均較DN未治療組減輕，免疫組化及RT-PCR半定量分析提示nephrin及podocin的表達(dá)較DN未治療組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 結(jié)論：nephrin、podocin是構(gòu)成裂孔隔膜（SD）兩種重