胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)阿霉素腎病大鼠足細(xì)胞Nephrin、Podocin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)阿霉素腎?。ㄎ⑿〔∽冃停┐笫笞慵?xì)胞Nephrin、Podocin表達(dá)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)分三組：對(duì)照組、模型組和RIMM-18細(xì)胞組。模型組、細(xì)胞組采用單次尾靜脈注射阿霉素5 mg/kg造模，3天后細(xì)胞組給予注射1×107RIMM-18細(xì)胞（胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞）。對(duì)照組給予正常大鼠尾靜脈注射生理鹽水，3天后對(duì)照組給予尾靜脈注射1mL無(wú)血清培養(yǎng)基。造模后第6、17、31天檢測(cè)各組大鼠的24h尿蛋白

2、、血清白蛋白、血清膽固醇及腎臟病理改變，采用免疫熒光及Western blot檢測(cè)各組大鼠Nephrin、Podocin的表達(dá)情況。 結(jié)果： （1）制模成功。 （2）RIMM-18細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠24h尿蛋白的影響：對(duì)照組、模型組、細(xì)胞組三組大鼠造模后第6天尿蛋白分別為10.15±0.47mg/L、10.98±0.85mg/L、10.92±0.73mg/L，三組大鼠間24小時(shí)蛋白尿沒(méi)有明顯差異，第17天分別為10.

3、32±0.57mg/L、83.88±7.88mg/L、78.5±6.44mg/L，模型組與細(xì)胞組之間無(wú)明顯差異，而兩組24小時(shí)尿蛋白明顯高于對(duì)照組，第31天分別為10.27±1.21mg/L、150.33±8.8mg/L、111.68±8.66mg/L，細(xì)胞組24小時(shí)尿蛋白明顯低于模型組，而細(xì)胞組與模型組24小時(shí)尿蛋白明顯高于對(duì)照組。 （3）RIMM-18細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠血清白蛋白的影響：對(duì)照組、模型組、細(xì)胞組三組大鼠造模后第6天

4、血清白蛋白分別為40.47±1.03g/L、39.05±1.39g/L、37.88±1.81g/L，三組大鼠間血清白蛋白沒(méi)有明顯差異；第17天分別為39.83±1.32g/L、21.54±1.86g/L、23.68±1.68g/L，模型組與細(xì)胞組之間無(wú)明顯差異，而兩組血清白蛋白明顯低于對(duì)照組；第31天分別為38.98±1.41g/L、15.72±1.03g/L、22.13±1.54g/L，細(xì)胞組血清白蛋白明顯高于模型組，而細(xì)胞組與模型組

5、血清白蛋白明顯低于對(duì)照組。 （4）RIMM-18細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠血清膽固醇的影響：對(duì)照組、模型組、細(xì)胞組三組大鼠造模后第6天血清膽固醇分別為1.23±0.11mmol/L、1.33±0.11mmol/L、1.27±0.13mmol/L，三組大鼠間血清膽固醇沒(méi)有明顯差異；第17天分別為1.17±0.14mmol/L、6.25±0.43mmol/L、6±0.23mmol/L，模型組與細(xì)胞組之間無(wú)明顯差異，而兩組血清膽固醇明顯高于對(duì)照組

6、；第31天分別1.2±0.13mmol/L、8.4±0.36 mmol/L、5.7±0.36mmol/L，細(xì)胞組血清膽固醇明顯低于模型組，而細(xì)胞組與模型組血清膽固醇明顯高于對(duì)照組。 （5）胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織病理的影響：光鏡下腎組織病理改變不明顯，各組之間無(wú)明顯差別。電鏡下模型組與對(duì)照組相比，造模后第6天即可見(jiàn)足突輕度融合，第17天足突節(jié)段性融合，第31天出現(xiàn)足突廣泛融合，而細(xì)胞組在第6、17天與模型組及相比無(wú)明

7、顯差別，于31天細(xì)胞組足突融合情況較模型組減輕。 （6）胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠腎小球足細(xì)胞蛋白Nephrin、Podocin表達(dá)的影響： ①對(duì)照組大鼠腎組織免疫熒光染色足細(xì)胞裂孔膜蛋白Nephrin及Podocin沿腎小球毛細(xì)血管袢呈連續(xù)線狀分布。模型組第6天即可發(fā)現(xiàn)Nephrin、Podocin免疫熒光染色表現(xiàn)為不連續(xù)段狀，并隨著病情的發(fā)展熒光強(qiáng)度逐漸減弱；細(xì)胞組免疫熒光染色在第6、17天與模型組相比沒(méi)有明顯差

8、別，第31天熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于模型組。 ②蛋白質(zhì)表達(dá)：在第6天對(duì)照組模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nephrin分別表達(dá)為0.74±0.03、0.53±0.04、0.55±0.09，模型組及細(xì)胞組與對(duì)照組相比Nephrin表達(dá)明顯下調(diào)，在第17天模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nephrin分別表達(dá)為0.29±0.05、0.32±0.04，兩者之間無(wú)明顯差異；在第31天對(duì)照組、模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白N

9、ephrin分別表達(dá)為0.73±0.04、0.15±0.01、0.21±0.02，細(xì)胞組Nephrin蛋白的表達(dá)明顯高于模型組，模型組及細(xì)胞組Nephrin蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組。在第6天對(duì)照組、模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Podocin分別表達(dá)為0.47±0.02、0.28±0.01、0.3±0.02，模型組及細(xì)胞組與對(duì)照組相比Podocin表達(dá)明顯下調(diào)，在第17天模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Podocin分別表

10、達(dá)為0.18±0.02、0.19±0.01，兩者之間無(wú)明顯差異；在第31天對(duì)照組、模型組及細(xì)胞組大鼠腎組織足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Podocin分別表達(dá)為0.48±0.02、0.08±0.01、0.12±0.03，細(xì)胞組Podocin蛋白的表達(dá)明顯高于模型組，模型組及細(xì)胞組Podocin蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組。 結(jié)論： （1）尾靜脈注射胚胎后腎間充質(zhì)干細(xì)胞可以降低ADN（微小病變型）大鼠的蛋白尿，減輕AND大鼠腎組織足細(xì)胞足突融