骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對阿霉素腎病大鼠p38和pp38的作用.pdf

1、目的：
　　分離并培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs），并對其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。通過腎組織病理觀察、生化指標(biāo)檢測、Western blot技術(shù)觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對阿霉素腎病大鼠的治療效果，并探討B(tài)MSC對p38和pp38的影響。
　　方法：
　　SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定：頸椎脫臼處死大鼠，無菌條件下剪取雙側(cè)股骨和脛骨，采集骨髓

2、，通過密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法，分離并培養(yǎng)BMSCs。體外純化、傳代、擴(kuò)增。取P3-5代細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物，并進(jìn)行成軟骨、成脂分化誘導(dǎo)，鑒定其生物學(xué)特性。將大鼠分為四組，即空白對照組、阿霉素組、干細(xì)胞組、強(qiáng)的松組，空白組不予任何處理，阿霉素組在注射ADR后予生理鹽水靜脈注射，干細(xì)胞組予BMSCs以2x106/只靜脈輸注，強(qiáng)的松組給予強(qiáng)的松5mg/d連續(xù)灌胃。于不同時間點(diǎn)采取大鼠靜脈血，測定血肌

3、酐、尿素、白蛋白、總膽固醇、甘油三脂；收集大鼠尿液，進(jìn)行24h尿蛋白定量；切取大鼠腎臟，經(jīng)染色后置于光鏡及電鏡下觀察腎臟病理變化；western-blot檢測各組大鼠腎臟在不同時間點(diǎn)蛋白p38和pp38表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1、獲取的BMSCs為均一的長梭形，呈集落樣生長，純度高、活性強(qiáng)。流式鑒定結(jié)果提示其高表達(dá)CD29、CD44、CD90，低表達(dá)CD11、CD34、CD45、CD106。經(jīng)誘導(dǎo)后能成功向成軟骨細(xì)胞、成

4、脂肪細(xì)胞分化。
　　2、各項生化指標(biāo)顯示：干細(xì)胞組、強(qiáng)的松組24h尿蛋白定量較阿霉素組有所下降，而肌酐、尿素等水平則未見明顯下降。
　　3、腎組織病理觀察：阿霉素組腎小球系膜細(xì)胞輕度增生，腎小管內(nèi)有蛋白管型，電鏡下可見足突融合及微絨毛變性。而干細(xì)胞組和強(qiáng)的松組腎臟只見足細(xì)胞輕度水腫。
　　4、Western blot提示：各干預(yù)組pp38的表達(dá)較空白組均有所上調(diào)，但干細(xì)胞組、強(qiáng)的松組pp38的表達(dá)量較阿霉素組少。