脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)兔退變椎間盤的作用的比較的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:分離、擴(kuò)增并鑒定兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs);
   建立鼠腰椎間盤退變的模型;觀察移植的干細(xì)胞能否在退變的椎間盤內(nèi)存活及增殖,探討這兩種間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)兔退變椎間盤的作用的比較。
   方法:①分別采用膠原酶消化法與全骨髓培養(yǎng)法加貼壁法分離純化兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)ADSCs及BMSCs細(xì)胞的表面標(biāo)志,MTT 法檢測(cè)ADSCs及BMSCs的生長(zhǎng)動(dòng)

2、力學(xué)。②采用髓核抽吸法建立兔椎間盤退變模型。③將BrdU標(biāo)記的ADSCs及BMSCs 移植于退變的兔椎間盤中,在術(shù)后2、4、8周行MRI 檢查后,處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,取材,行HE 染色觀察兔退變椎間盤內(nèi)的修復(fù)情況,BrdU免疫組化染色觀察細(xì)胞在退變椎間盤內(nèi)的存活及增殖情況,間苯三酚法檢測(cè)蛋白多糖含量的變化情況。
   結(jié)果:①兔ADSCs及BMSCs 體外分離純化培養(yǎng),增殖迅速,短時(shí)間內(nèi)可以獲得足夠的種子細(xì)胞數(shù)量;流式細(xì)胞儀檢測(cè)ADS

3、Cs及BMSCs的表面抗原均為CD29 陽(yáng)性,CD45陰性;MTT 法檢測(cè)顯示ADSCs及BMSCs 增殖能力較強(qiáng),消化傳代后的第3代細(xì)胞經(jīng)過(guò)潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,然后過(guò)渡到平臺(tái)期。②髓核抽吸法可以成功的建立椎間盤退變的動(dòng)物模型。③術(shù)后2、4和8周,MRI 檢查顯示,3組椎間盤都出現(xiàn)退變表現(xiàn),椎間隙變窄,T2 加權(quán)相上椎間盤信號(hào)變低。但ADSCs 移植組與BMSCs 移植組的椎間盤退變比缺損退變組退變的程度較輕。④移植的ADSCs和BMS

4、Cs在缺損椎間盤中持續(xù)存在,細(xì)胞被5-BrdU標(biāo)記。2周時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較多,8周后陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少,并且隨著時(shí)間的推移,陽(yáng)性細(xì)胞由中央?yún)^(qū)域向外周遷移。⑤HE 染色顯示ADSCs及BMSCs在退變椎間盤內(nèi)可以存活和增殖,并能夠保持椎間盤的組織結(jié)構(gòu)。⑥ADSCs 移植組和BMSCs 移植組中的蛋白多糖明顯比缺損退變組的含量多,并且差異有顯著差異(P<0.05)。
   結(jié)論:①膠原酶消化法和全骨髓培養(yǎng)法可以成功的分離獲取脂肪間充質(zhì)干

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