兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及其載體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：于體外對(duì)新西蘭白兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，分別采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法，并對(duì)兩種不同方法進(jìn)行比較。應(yīng)用培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和羊膜構(gòu)建結(jié)膜缺損的生物學(xué)修復(fù)材料。
　　方法：
　　1.正常的3月齡的新西蘭白兔，在無(wú)菌條件下，行骨髓穿刺獲得新西蘭白兔骨髓，分別采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離、純化、培養(yǎng)，并進(jìn)行傳代觀察。
　　2.分別將第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于預(yù)置蓋玻片

2、的六孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞90％以上融合時(shí)，對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫組化染色，并對(duì)兩種方法培養(yǎng)細(xì)胞的免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
　　3.將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種到羊膜基底面，待細(xì)胞融合，取材后于掃描電鏡下觀察細(xì)胞與羊膜的貼合狀況，于透射電鏡下觀察細(xì)胞情況。
　　結(jié)果：
　　1.兩種方法培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)相似。原代培養(yǎng)的新西蘭白兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈簇狀、貼壁呈集落生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)為梭形、多角形，傳代后細(xì)胞形態(tài)較為

3、均一，分布均勻。細(xì)胞增長(zhǎng)活躍、傳代周期短。
　　2.免疫組織化學(xué)染色CD34（-）、CD44（+）。
　　3.全骨髓培養(yǎng)法較密度梯度離心法CD44的平均光密度值低，CD34的平均光密度值高。
　　4.電鏡下觀察到細(xì)胞可以生長(zhǎng)于羊膜基底面，與羊膜良好貼合。
　　結(jié)論：
　　1.利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法均可以得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并可以傳代，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。
　　2.免疫組織化學(xué)結(jié)果支持所獲