骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)兔退變椎間盤的實驗研究.pdf

1、目的： 體外分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并觀察其生物學(xué)特性；模擬人后路髓核摘除術(shù)進(jìn)行后外側(cè)穿刺抽吸髓核建立椎間盤退變動物模型的可行性研究；觀察移植BMSCs能否在退變的椎間盤內(nèi)存活和增殖，及其是否能延緩椎間盤的退變和促進(jìn)退變椎間盤的修復(fù)實驗研究。 方法： ①.采用密度梯度離心法加貼壁培養(yǎng)法對兔BMSCs進(jìn)行了分離純化，流式細(xì)胞儀器(FCM)分析BMSCs表面標(biāo)志，用含有轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)

2、的無血清誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)2周后，行HE、Ⅱ型膠原免疫組化檢查是否BMSCs向軟骨細(xì)胞定向分化。 ②.模擬人后路髓核摘除術(shù)進(jìn)行后外側(cè)穿刺抽吸髓核建立椎間盤退變動物模型，于術(shù)后2、4和8周分別行X線、MRI影像學(xué)和HE染色病理觀察椎間盤退變的情況。 ③.將帶有BrdU標(biāo)記的BMSCs移植于退變2周后動物模型中，于術(shù)后2周、4周、8周和12周隨機取8只兔子行影像學(xué)(X線及MRI)后，再行HE和BrdU免疫組化病理學(xué)檢查，觀察實驗

3、組與對照組的變化。 結(jié)果： ①.骨髓MSCs體外分離培養(yǎng)，其增殖迅速，短時間內(nèi)可大量擴增達(dá)到組織工程需要的種子細(xì)胞數(shù)量要求；FCM檢測BMSCs的表面抗原CD44陽性，CD45陰性；且細(xì)胞保持未分化狀態(tài)，經(jīng)誘導(dǎo)后可向成軟骨細(xì)胞方向分化。 ②.通過x線、MRI及HE病理學(xué)證明成功建立后外側(cè)穿刺抽吸髓核制作椎間盤退變動物模型； ③.在移植術(shù)后各時間點均可觀察到BrdU免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞的存在。

4、④.骨髓MSCs移植可以有效抑制椎間隙狹窄及椎間盤水分丟失；在移植術(shù)后12周時，MSCs移植組平均DHI為81.66±2.05％，PBS對照組平均DHI為61.01±3.57％。組織學(xué)染色結(jié)果顯示，MSCs能夠在退變椎間盤內(nèi)存活和增殖，并能夠保持椎間盤的結(jié)構(gòu)。術(shù)后4、8、12周病理分級實驗組與對照組相比具有顯著意義(P<0.05)。在整個實驗過程中，各組椎間盤髓核和中、內(nèi)層纖維環(huán)中均未觀察到血管增生、炎性細(xì)胞浸潤及骨贅形成。 結(jié)