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1、目的:探討纖維環(huán)穿刺法誘導椎間盤退變建立動物模型的可行性和;BMSCs移植至退變動物模型后,觀察移植后退變椎間盤中細胞因子表達的變化及其規(guī)律。
方法:(1)取32只新西蘭大白兔行暴露椎間盤,其中24只大白兔經(jīng)右側(cè)腹膜外入路準確暴露L3/4、L4/5和L5/6,血管鉗夾持16G穿刺針準確刺入L3/4、L4/5和L5/6椎間盤的纖維環(huán),造成纖維環(huán)破裂,誘導退變。并隨機分成空白組(B組)、干預組(C組)和實驗組(D組);剩下8只暴露
2、椎間盤,但不穿刺,作為正常組(A組);于術(shù)后4周,在每組中隨機抽取2只實驗動物行MRI,觀察實驗動物椎間盤退變情況;(2)將培養(yǎng)擴增的P3代BMSCs移植入已退變椎間盤的動物模型D組中,C組植入等量的藻酸鹽,A、B組不作任何處理;(3)移植后2、4、8、12周,每次每組取2只實驗動物椎間盤,并利用RT-PCR檢測椎間盤中MMP-1、MMP-2、MMP-3、IL-1、TNF-α和TGF-β的表達量,Weston Blot檢測椎間盤中PG、
3、Ⅱ型膠原的含量變化;(4)SPSS12.0分析上述各數(shù)據(jù)。
結(jié)果:(1)通過MRI、WB可以證明纖維環(huán)穿刺法可以有效誘導動物椎間盤退變;(2)RT-PCR,WB檢測結(jié)果經(jīng)SPSS12.0統(tǒng)計學分析:退變椎間盤中MMP-1、MMP-2、MMP-3、IL-1和TNF-α表達量較正常椎間盤高(P<0.05);BMSCs移植入退變椎間盤后MMP-1、MMP-2、MMP-3、IL-1和TNF-α的表達量減少(P<0.05),并隨移植時間
4、延長,表達量呈遞減趨勢;退變椎間盤中TGF-β表達量較正常椎間盤低(P<0.05);BMSCs的移植入退變椎間盤后TGF-β的表達量增加(P<0.05),并隨移植時間延長,表達量呈遞增趨勢;PG和Ⅱ型膠原在退變椎間盤的表達小于正常椎間盤,移植入BMSCs后,兩者表達量增加,并隨時間的延長,增加越明顯。
結(jié)論:(1)纖維環(huán)穿刺法可以有效誘導兔椎間盤的緩慢退變,為研究椎間盤的退行性變提供有效的動物模型;(2)退變椎間盤中MMP-1
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