2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:本實(shí)驗(yàn)以人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為細(xì)胞模型,將不同濃度的atRA與BMSCs共同孵育不同的時(shí)間,通過(guò)嚴(yán)格的體外實(shí)驗(yàn),觀察atRA作用后BMSCs細(xì)胞的活力及細(xì)胞表面CD54、CD106表達(dá)的變化。以探討其在體外水平上atRA對(duì)CD54、CD106表達(dá)的影響,為該藥在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及臨床研究中提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:調(diào)整BMSCs細(xì)胞濃度為5×103/ml,接種于96孔板,每種濃度設(shè)3個(gè)平行孔。細(xì)胞培養(yǎng)液為含10%FCS的DMEM-LG

2、培養(yǎng)基。加入不同濃度的atRA(空白對(duì)照組為O,A組為0.01μmol/L,B組為0.1μmol/L,C組為1.0μmol/L,D組10.0μmol/L),在37℃,5%CO2飽和濕度下CO2孵箱內(nèi)共同孵育。采用四唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)BMSCs細(xì)胞存活率。在不同時(shí)間(12h,24h,48h,96h),每孔加MTT(5g/L)10μl孵育4h,吸棄上清液,加入二甲基亞砜(DMSO)50μl,振蕩10min,充分溶解結(jié)晶,用酶標(biāo)儀于45

3、0nm處測(cè)定吸光度(A)值。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍,以檢測(cè)BMSCs細(xì)胞存活率;另外調(diào)整BMSCs細(xì)胞濃度為5×104/ml,接種于6孔板,每種濃度設(shè)2個(gè)復(fù)孔,每孔總體系為2.5ml。加入不同濃度的atRA(空白對(duì)照組為O,A組為0.01μmol/L,B組為0.1μmol/L,C組為1.0μmol/L,D組10.0μmol/L),在37℃,5%CO2飽和濕度下CO2孵箱內(nèi)共同孵育。在不同時(shí)間(12h,24h,48h,96h)把消化的細(xì)胞離心后

4、將細(xì)胞濃度調(diào)整至5×106/ml,同時(shí)加入CD54-PE及CD106-FITC單抗各10μl,然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面的平均熒光強(qiáng)度。 結(jié)果:1)在本實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)條件下,用MTT法觀察不同濃度atRA處理12h,24h,48h,96h對(duì)BMSCs細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明atRA濃度為0.01μmol/L時(shí)對(duì)BMSCs增殖抑制與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P>0.05);atRA濃度為0.1μmol/L-10.0μmol/L時(shí)

5、對(duì)BMSCs增殖抑制與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05);且在相同作用時(shí)間下,atRA對(duì)BMSCs細(xì)胞的增殖抑制作用隨atRA濃度的升高而升高;當(dāng)在相同的atRA作用濃度下,BMSCs細(xì)胞的增殖抑制作用隨atRA作用時(shí)間的延長(zhǎng)而升高,atRA濃度為0.1μmol/L-10.0μmol/L作用時(shí)間12h、24h、48h、96h組間比較有顯著差異(P<0.05)。 2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面CD54、CD106平均熒光強(qiáng)度。a

6、tRA濃度為0.01μmol/L-10.0μmol/L時(shí)對(duì)細(xì)胞表面CD54、CD106的作用與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05);且在相同作用時(shí)間下,atRA對(duì)BMSCs細(xì)胞CD54、CD106的作用隨atRA濃度的升高而升高;當(dāng)在相同的atRA作用濃度下,atRA對(duì)BMSC細(xì)胞CD54、CD106的作用隨atRA作用時(shí)間的延長(zhǎng)而升高;atRA濃度為0.01μmol/L-10.0μmol/L時(shí)12h、24h、48h、96h組間比較

7、有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論:1)atRA對(duì)BMSCs細(xì)胞有增殖抑制作用,濃度梯度為0.1μmol/L-10.0μmol/L作用在12-96h時(shí)段時(shí),其作用表現(xiàn)為時(shí)間和劑量依賴性,有利于指導(dǎo)臨床用藥。 2)atRA對(duì)BMSCs細(xì)胞有上調(diào)CD54、CD106的作用:濃度梯度為0.01μmol/L-10.0μmol/L時(shí),作用隨藥物濃度升高而增強(qiáng);上調(diào)作用隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng),atRA作用在12小時(shí)即可發(fā)生,48-96小

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