TGF-β-,1-干預(yù)下體內(nèi)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對椎間盤退變治療的實驗研究.pdf

1、背景介紹：由椎間盤退變(Intervertebral Discs：Degenerative IDD)所引起的脊柱疾患及疼痛逐年增多，對社會經(jīng)濟(jì)造成巨大損失。目前的治療方法主要有保守治療和手術(shù)治療，主要針對的是患者的臨床癥狀，而不是針對疾病的病理過程。故目前尚缺乏十分有效的治療手段。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在細(xì)胞水平治療 IDD 有望成為現(xiàn)實。近來用椎間盤移植或椎間盤細(xì)胞移植來修復(fù)退變椎間盤的研究已取得快速的進(jìn)展。但是由于體外培養(yǎng)椎間盤

2、細(xì)胞時難于取材、增殖能力較弱、無法大量擴(kuò)增，故如何提供高質(zhì)量和數(shù)量的細(xì)胞仍是現(xiàn)階段的研究重點。 骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(MMSCs)是近年來在很多領(lǐng)域研究的較為成功地用于移植的一種成體干細(xì)胞。其優(yōu)點在于易于獲取，在局麻下行骨髓穿刺即可獲得，體外擴(kuò)增方便，可以在體外短期內(nèi)大量擴(kuò)增達(dá)到所需要的數(shù)量。在不同的誘導(dǎo)條件下，具有向中胚層組織細(xì)胞分化的能力，如向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分化能力。用自體的 MMSCs 所誘導(dǎo)的細(xì)

3、胞用于自身的組織修復(fù)不存在免疫排斥反應(yīng)是 MMSCs 又一個優(yōu)點。近年來隨著對干細(xì)胞研究的逐漸深入，將干細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化與組織工程的方法結(jié)合起來即治療性克隆(thaerapeutic-cloning)概念的提出為今后指明了研究方向<'[1]>。MMSCs是目前最有希望應(yīng)用于椎間盤組織工程的干細(xì)胞。 在體內(nèi)誘導(dǎo)MMSCs向髓核細(xì)胞分化的研究文獻(xiàn)報道較為鮮見，本研究旨將在 FGF-β1+LG-DMEM+Ham's-F12+100

4、﹪胎牛血清培養(yǎng)的 MMSCs 注射到退變椎間盤模型后觀察其生物學(xué)行為來研究體內(nèi)誘導(dǎo) MMSCs 向髓核細(xì)胞分化的必要條件及對臨床工作的指導(dǎo)意義。 目的：評價在 TGF-β1干預(yù)下的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到兔退變椎間盤后是否可誘導(dǎo)向髓核細(xì)胞分化并增加蛋白多糖和Ⅱ型膠原的含量。 方法：將純種新西蘭大白兔24，只分為3組，一組是實驗組，將白骨髓血中分離、純化和在 TGF-β1干預(yù)下成功傳代培養(yǎng)后的兔MMSCs復(fù)合透明質(zhì)酸鈉

5、20ul植入其退變椎間盤中；一組為對照組，其為正常椎間盤；一組為模型組，僅在退變椎間盤注入透明質(zhì)酸鈉20ul做為對照。分別于2、4、6、8周用間苯三酚分光光度法測定蛋白多糖含量的變化；免疫組化法測定Ⅱ型膠原的含量變化。所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.5統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。 結(jié)果：原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)顯示兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有活躍的增殖倍增能力，并且8周內(nèi)蛋白多糖和II型膠原的含量的恢復(fù)實驗組對比模型組增高明顯，統(tǒng)計學(xué)表明差異有顯著