兔異體骨髓間充質(zhì)干細胞抑制增生性瘢痕的實驗研究.pdf

1、目的:初步探討骨髓間充質(zhì)干細胞對活體動物增生性瘢痕的影響,以探討間充質(zhì)干細胞用于增生性瘢痕防治的可行性。
　　方法:以6只成年健康雄性新西蘭白兔為實驗動物,于新西蘭白兔雙耳腹側(cè)分別建立大小為6mm的圓形增生性瘢痕模型,每只兔耳共6個增生性瘢痕模型。隨機選擇6只兔設(shè)立左耳為實驗組(共36個創(chuàng)面),右耳為對照組(共36個創(chuàng)面):實驗組分別于上皮化完成后第2日(術(shù)后20天左右)和上皮化完成后第10日(術(shù)后30天左右),取第5代經(jīng)BrdU

2、標記后生長良好的骨髓間充質(zhì)干細胞( bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)于增生性瘢痕軟骨膜上層進行環(huán)形注射(1×105/0.2ml)。對照組在上述相應(yīng)時間點注射相同劑量的PBS緩沖液;實驗組與對照組分別于第2次細胞移植后7天(術(shù)后37天左右)取材。記錄各實驗組增生性瘢痕的大體外觀,HE及VG染色觀察其組織學(xué)變化,實驗組行免疫熒光染色對移植的干細胞進行示蹤,實時熒光-聚合酶鏈式反應(yīng)(Real

3、Time-PCR,RT-PCR)檢測兩組增生性瘢痕組織中核心蛋白多糖(decorn, DCN)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表達變化情況,酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)檢測增生性瘢痕組織中DCN、TGF-β1、I型膠原及III型膠原的蛋白表達情況。
　　結(jié)果:術(shù)后37天對照組瘢痕增生明顯,

4、色紅質(zhì)硬,突出于皮面;實驗組瘢痕組織體積縮小,變平變軟,色澤輕度變淺。HE染色結(jié)果:對照組基底層細胞排列紊亂,鏡下見大量成纖維細胞增殖及炎性細胞浸潤,成纖維細胞排列無序或以旋渦狀排列;實驗組基底層細胞排列較整齊,真皮淺層成纖維細胞數(shù)量明顯減少,排列較整齊,結(jié)締組織增生減少,炎性細胞減少。VG染色結(jié)果:對照組鏡下見大量膠原纖維沉積,膠原纖維粗大,排列雜亂無序;實驗組膠原沉積減少,膠原纖維之間排列疏松而規(guī)整。通過免疫熒光染色觀察到第二次細胞

5、移植后7天,瘢痕組織內(nèi)仍可以發(fā)現(xiàn)有存活的BMSCs。RT-PCR結(jié)果:實驗組TGF-β1mRNA表達量較對照組明顯降低,DCNmRNA表達量明顯升高,結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Elisa結(jié)果:實驗組TGF-β1膠原蛋白表達量較對照組降低,DCN蛋白表達量較對照組升高,結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);實驗組I型、III型膠原蛋白表達量較對照組降低,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:兔耳創(chuàng)面在上皮化形成后行