免脂肪干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨能力的比較.pdf

1、目的:比較兔脂肪來(lái)源和骨髓來(lái)源的兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨能力。
　　 方法:選取六月齡新西蘭大白兔,取腹部脂肪,分離培養(yǎng)ADSCs并進(jìn)行傳代。取兔雙側(cè)股骨,采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BMSCs并進(jìn)行傳代。使用倒置顯微鏡觀察兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)增殖情況。比較兩種細(xì)胞的原代及2、3代的傳代時(shí)間。繪制3代ADSCs和BMSCs的生長(zhǎng)曲線,測(cè)定兩種細(xì)胞的倍增時(shí)間并進(jìn)行比較。選取兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的3代細(xì)胞進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo),實(shí)驗(yàn)分為四組

2、:ADSCs成軟骨誘導(dǎo)組(A1),ADSCs一般DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)組(A2),BMSCs成軟骨誘導(dǎo)組(B1),BMSCs一般DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)組(B2)。其中A1、B1為實(shí)驗(yàn)組,A2、B2為對(duì)照組。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)增殖情況。培養(yǎng)14天后,實(shí)驗(yàn)組行甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色,對(duì)照組行Ⅱ型膠原免疫組化染色。Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色灰度值評(píng)分法比較實(shí)驗(yàn)組中A1、B1的成軟骨能力。
　　 結(jié)果:BMSCs原代細(xì)

3、胞呈聚集樣生長(zhǎng),而ADSCs原代細(xì)胞呈單個(gè)、散在生長(zhǎng)。自第二代開(kāi)始,BMSCs的生長(zhǎng)方式與ADSCs一致,以單個(gè)、散在方式生長(zhǎng)。單層培養(yǎng)時(shí),這兩種間充質(zhì)干細(xì)胞增殖迅速且穩(wěn)定,形態(tài)上均為成纖維細(xì)胞樣,呈梭形,沒(méi)有觀察到明顯的形態(tài)學(xué)差異。原代ADSCs傳代時(shí)間為6天,第2代、第3代的ADSCs傳代時(shí)間為3天。原代BMSCs傳代時(shí)間為10天,第2代、第3代的BMSCs傳代時(shí)間為5天。原代ADSCs傳代時(shí)間較原代BMSCs快4天。而第2代、第3

4、代的ADSCs傳代時(shí)間較同代BMSCs快2天。生長(zhǎng)曲線示ADSCs增殖速度要快于BMSCs,ADSCs倍增時(shí)間為26h,BMSCs為36h。實(shí)驗(yàn)組加入成軟骨誘導(dǎo)液后,細(xì)胞的增殖緩慢,細(xì)胞的形態(tài)由長(zhǎng)梭形逐漸變成了多角形,或者圓形。而對(duì)照組細(xì)胞的形態(tài)無(wú)變化,皆為梭形。成軟骨誘導(dǎo)14天后,實(shí)驗(yàn)組A1和B1甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色皆為陽(yáng)性表達(dá)。而對(duì)照組Ⅱ型膠原免疫組化染色陰性表達(dá)。Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色灰度值評(píng)分示,B1組表達(dá)Ⅱ型膠