版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、牙齒的發(fā)生和發(fā)育是由釉質(zhì)形成所需的牙源性上皮細(xì)胞和形成牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的牙源性間充質(zhì)細(xì)胞共同來(lái)完成。因此牙齒的再生必須要有兩種細(xì)胞:上皮和間充質(zhì)細(xì)胞。組織工程化牙齒研究的關(guān)鍵在于:獲取來(lái)源豐富且具有成牙潛能的種子細(xì)胞,使其在適宜的成牙微環(huán)境下發(fā)育、分化。由于牙源性種子細(xì)胞的難以獲得,所以尋找合適的的成體干細(xì)胞作為種子細(xì)胞是再生研究的重要目標(biāo)。人牙齦成纖維細(xì)胞是口腔粘膜牙齦組織的主要細(xì)胞,在牙齦、牙周組織的生理和病理中起重要作用。這種細(xì)胞
2、來(lái)源豐富,有很強(qiáng)的生長(zhǎng)和自我繁殖能力。依據(jù)真皮組織干細(xì)胞的研究進(jìn)展情況來(lái)看,由于口腔粘膜與皮膚類(lèi)似所以提示研究者在口腔粘膜中也應(yīng)該含有類(lèi)似的成體干細(xì)胞存在。因成體干細(xì)胞具有可塑性,如能從牙齦固有層中分離出間充質(zhì)干細(xì)胞,將非牙源性成體干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為牙源性細(xì)胞,將為組織工程牙齒的構(gòu)建提供新的種子細(xì)胞來(lái)源。本研究采用組織塊和胰酶消化法原代培養(yǎng)人牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞和真皮干細(xì)胞,并對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。在此基礎(chǔ)上利用
3、SD大鼠發(fā)育早期的牙胚條件培養(yǎng)液來(lái)誘導(dǎo)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞向特定方向分化的可能性,探討牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞向牙源性間充質(zhì)細(xì)胞分化的能力。為篩選和誘導(dǎo)組織工程牙齒種子細(xì)胞提供研究參考。取得的主要研究結(jié)果如下:
1.牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性的研究
經(jīng)患者/監(jiān)護(hù)人同意后取臨床上導(dǎo)萌術(shù)或者智齒拔出時(shí)切下的牙齦采用組織塊和胰酶消化法進(jìn)行牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。利用磁珠分選法和有限稀釋法對(duì)原代培養(yǎng)的牙齦間充質(zhì)細(xì)胞
4、進(jìn)行篩選純化,將克隆形成的細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)及生長(zhǎng)狀況。對(duì)篩選細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞表型以及細(xì)胞周期的特性進(jìn)行分析。結(jié)果顯示所培養(yǎng)的牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)多為長(zhǎng)梭形,為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞表型,結(jié)果顯示對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)志物CD29、CD90分別有99.8%和99.4%的表達(dá)陽(yáng)性。說(shuō)明了我們獲取的細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性。與此同時(shí)對(duì)于CD34和CD45的低表達(dá)也表明我們培養(yǎng)的牙齦纖維來(lái)
5、源的間充質(zhì)干細(xì)胞為非造血系來(lái)源細(xì)胞。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞具有克隆形成能力,生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定,經(jīng)誘導(dǎo)后有成骨和成脂肪能力。流式細(xì)胞周期分析顯示所培養(yǎng)的細(xì)胞多數(shù)處于G0/G1期。免疫化學(xué)檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物CD105、CD146、STOR-1細(xì)胞均呈陽(yáng)性表達(dá);增殖細(xì)胞核抗原Ki67,多數(shù)細(xì)胞呈陽(yáng)性且增殖旺盛。由此看來(lái)確定所分離細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。
2.牙齦固有層間充質(zhì)干細(xì)胞與牙周膜、真皮干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較.
為進(jìn)一步探討牙
6、齦固有層間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性,我們對(duì)人牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞和真皮干細(xì)胞采用組織塊法進(jìn)行原代培養(yǎng)。繪制生長(zhǎng)曲線,測(cè)定三者堿性磷酸酶活性;使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三種細(xì)胞的表面分子表達(dá)、細(xì)胞增殖檢測(cè)(MTT、細(xì)胞周期分析)、多向分化(成脂、成骨)能力檢測(cè)、RT-PCR檢測(cè)。觀察對(duì)比三種細(xì)胞其形態(tài)、生長(zhǎng)方式、增殖能力等生物學(xué)特性的異同。結(jié)果顯示,光鏡下觀察三種細(xì)胞在形態(tài)和結(jié)構(gòu)上相似。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率及細(xì)胞增殖能力明顯高于
7、牙周膜干細(xì)胞但低于真皮干細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)三種干細(xì)胞的表面分子CD90、CD105表達(dá)中,牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)最高。在PCR檢測(cè)中牙周膜干細(xì)胞、牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的I型膠原表達(dá)強(qiáng)于真皮干細(xì)胞,Ⅲ型膠原表達(dá)牙周膜干細(xì)胞最強(qiáng),真皮干細(xì)胞其次,牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)最弱。牙齦間充質(zhì)細(xì)胞的ALP水平明顯高于真皮干細(xì)胞,但低于牙周膜干細(xì)胞。成脂、成骨多向分化能力檢測(cè)中牙周膜干細(xì)胞>牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞>真皮干細(xì)胞。結(jié)論:牙周膜干細(xì)胞具有較強(qiáng)的成骨能力
8、,是理想的牙齒組織工程的種子細(xì)胞。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞成脂成骨能力優(yōu)于真皮干細(xì)胞易于培養(yǎng)成活,增殖力強(qiáng),具有牙周膜干細(xì)胞的一些特點(diǎn),也可考慮作為牙齒組織工程的種子細(xì)胞。
3.牙胚條件培養(yǎng)基對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞牙向分化的體外誘導(dǎo)研究
以牙胚細(xì)胞條件培養(yǎng)液為輔助誘導(dǎo)液對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞提供成牙微環(huán)境,誘導(dǎo)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行牙向分化誘導(dǎo)。結(jié)果表明,牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)體外一段時(shí)間的牙胚條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后,細(xì)胞增殖能力變強(qiáng);牙齦間
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞膜片牙周再生能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 免脂肪干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨能力的比較.pdf
- 真皮間充質(zhì)干細(xì)胞和心臟間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.pdf
- 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化比較的體外研究.pdf
- 牙髓干細(xì)胞與外胚間充質(zhì)干細(xì)胞表型和分化能力的比較研究.pdf
- 大鼠呼吸黏膜外胚間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及成神經(jīng)分化能力的比較.pdf
- 炎癥刺激對(duì)人牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨干能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 拉布拉多犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與牙周膜基質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞裸鼠皮下成骨能力的比較性研究.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向類(lèi)纖維環(huán)細(xì)胞分化效應(yīng)的比較研究.pdf
- 人真皮間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)、鑒定及初步應(yīng)用.pdf
- 犬牙槽骨來(lái)源干細(xì)胞和髂骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成骨能力的比較.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
- 曲古抑菌素A促進(jìn)炎癥牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究.pdf
- 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)兔退變椎間盤(pán)的作用的比較的研究.pdf
- 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞
- 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在修復(fù)脊髓損傷中的比較研究.pdf
- 兔不同部位脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨能力的差異.pdf
- 胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定及木豆素促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 兔傳代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的篩選及其成骨能力的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論