骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)成類髓核細胞的體外研究.pdf

1、目的:
　　1.分離、培養(yǎng)擴增和鑒定兔骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）。
　　2.通過體外誘導(dǎo)BMSCs成類髓核細胞，尋找細胞體內(nèi)移植的合適時間點。
　　方法:
　　應(yīng)用單純貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、擴增兔BMSCs和髓核細胞，并應(yīng)用免疫細胞化學方法檢測BMSCs表面相對特異性分子(CD90、CD44、CD45、CD34)的表達率以鑒定BMSCs；將接種有BMSCs的Transwell小室置于含有髓核細胞的培養(yǎng)皿中，建

2、立共培養(yǎng)模型；制定誘導(dǎo)BMSCs生長曲線，用RT-PCR（reverse transcription PCR）和Western blot檢測其表達蛋白聚糖和Ⅱ型膠原，結(jié)合以上檢測尋找最佳共培養(yǎng)時間，為椎間盤組織工程種子細胞的更深入研究提供實驗數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:
　　應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法成功分離、培養(yǎng)、擴增兔BMSCs和髓核細胞，免疫細胞化學檢測BMSCs表面相對特異性分子的陽性表達率顯示：CD90為91.2％，CD44為93.5%

3、，CD45為4.4%，CD34為5.5%。在共培養(yǎng)模型中，經(jīng)細胞生長曲線檢測、RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果提示BMSCs與髓核細胞共培養(yǎng)可誘導(dǎo)BMSCs表達蛋白聚糖和Ⅱ型膠原，在三代以內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)細胞生長曲線無明顯改變，結(jié)合以上檢測認為細胞共培養(yǎng)15天左右達到最佳狀態(tài)，適合進行體內(nèi)移植。
　　結(jié)論:
　　1.采用單純貼壁法可以成功分離出純度較高的BMSCs；
　　2.在Transwe ll小室和培養(yǎng)皿構(gòu)成