骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇過早衰老髓核細(xì)胞的初步研究.pdf

1、目的：探討體外非接觸共培養(yǎng)條件下兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells，MSCs)雞尾酒效應(yīng)對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)過早衰老髓核細(xì)胞(nucleus pulposuscells，NPCs)的復(fù)蘇作用。
　　 方法：體外分離、培養(yǎng)兔MSCs和NPCs，鑒定細(xì)胞表型。取P3代MSCs和原代NPCs非接觸共培養(yǎng)，并分為：A組單純NPCs培養(yǎng)，不行過早衰老誘導(dǎo)；B組MSCs與NPCs細(xì)胞比例1:1共培養(yǎng)；C組MSCs與NP

2、Cs細(xì)胞比例1:3共培養(yǎng)；D組單純NPCs培養(yǎng)，行過早衰老誘導(dǎo)；B、C、D三組用50μmol/L雙氧水處理NPCs誘導(dǎo)其過早衰老。共培養(yǎng)后第3d、6d，通過SA-β-gal的細(xì)胞化學(xué)染色檢測各組NPCs的細(xì)胞老化率，半定量RT-PCR檢測聚集蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型膠原的相對轉(zhuǎn)錄水平。
　　 結(jié)果：P3代MSCs高表達(dá)CD44，低表達(dá)CD34、CD45；NPCs于胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)Ⅱ型膠原和聚集蛋白多糖。共培養(yǎng)3d后，B組(7.6

3、2±0.04％)和C組(7.24±0.11％)NPCs的細(xì)胞老化率均已低于D組(11.3±0.48％)，而高于A組(0.80±0.07％)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；并隨著培養(yǎng)時間的延長，C組的細(xì)胞老化率開始低于B組(P<0.05)。共培養(yǎng)后A組、B組和C組NPCs的Aggrecan、Ⅱ型膠原相對轉(zhuǎn)錄水平均高于D組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：在體外非接觸共培養(yǎng)體系下，MSCs可通過旁分泌的雞尾