氯沙坦對IgA腎病大鼠腎組織p38的影響.pdf

1、目的：IgA腎?。↖gA nephropathy，IgAN）是目前世界上最常見的慢性進行性的原發(fā)性腎小球疾病。其主要病理特征是IgA免疫復合物在系膜區(qū)沉積，導致系膜細胞的增殖和細胞外基質(zhì)的沉積，引起一系列臨床及病理生理改變，是導致終末期腎?。‥SRD）的主要原因之一。隨著腎臟活組織穿刺技術(shù)的逐漸推廣，兒童IgA腎病的診斷率也在逐年提高，但目前尚無特效的治療方法，臨床仍以控制癥狀及經(jīng)驗性治療為主。以往認為IgA腎病是一種良性疾病，預后好。

2、但長期隨訪結(jié)果發(fā)現(xiàn)約20％～50％的成人患者最終發(fā)展至腎功能衰竭[1]。兒童患者預后較成人好，但起病5年、10年、15年后分別有5％、6％及11％的患兒產(chǎn)生慢性腎功能衰竭。因此如何積極防治IgA腎病在我國腎臟病研究中具有舉足輕重的地位。大量的研究表明腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-AngiotensinSystem，RAS），尤其是血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，ATⅡ），是慢性腎臟疾病進行性發(fā)展的重要影響因素。RAS在IgA

3、腎病的發(fā)病中也有重要作用。應用RAS阻滯劑可有效改善IgA腎病的臨床癥狀，血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（AngiotensinⅡ receptor blockers，ARB）是腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）抑制劑，近年來被有效地用于IgA腎病的治療。氯沙坦是特異性血管緊張素ⅡⅠ型受體拮抗劑，對于IgA腎病患者，尤其是合并蛋白尿或高血壓的患者，氯沙坦有利于保護腎功能延緩腎衰竭的發(fā)生。研究表明，p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路可被血管緊張素Ⅱ等炎性因子

4、激活，在炎癥反應中發(fā)揮著重要的作用而且通過多種途徑促進腎臟纖維化。而血管緊張素ⅡⅠ型受體拮抗劑的腎臟保護作用是否通過阻斷p38MAPK轉(zhuǎn)導通路改善腎臟纖維化、延緩腎小球硬化的進程目前尚無明確定論。我們以IgA腎病大鼠為模型，觀察氯沙坦對IgA腎病大鼠腎臟組織中p38MAPK表達情況的影響，初步探討血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的腎臟保護作用機制及治療IgA腎病的作用機制。
　　 方法：Wistar雄性大鼠，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供

5、（試驗動物質(zhì)量合格證編號：702022）。按湯穎等建立的方法，選取體重100～120g雄性Wistar大鼠30只按隨機數(shù)字表隨機分成對照組（n=10）；IgA腎病組（n=10）；氯沙坦（losartan，杭州默沙東制藥公司提供）組（n=10）。IgA腎病組和氯沙坦組大鼠以牛血清白蛋白400mg·kg-1·d-1隔天灌胃，持續(xù)6周；皮下注射蓖麻油0.5mL+四氯化碳0.1mL，每周1次，持續(xù)9周；分別于第6、8周以脂多糖0.05mg尾靜脈

6、注射，直至10周末。實驗期間對照組動物自由進食飲水，不給予任何藥物干預。建模后將IgA腎病組大鼠腎皮質(zhì)組織切成3gm的冰凍切片，采用兔抗大鼠IgA和FITC標記羊抗兔IgG間接免疫熒光染色，熒光顯微鏡下觀察到腎小球系膜區(qū)IgA沉積陽性，PAS和Masson染色顯示系膜細胞增生和系膜基質(zhì)的沉積表明造模成功。模型建成后，氯沙坦組大鼠給予氯沙坦20mg-kg-1·d-1灌胃四周，對照組給予等量蒸餾水灌胃四周，總實驗周期為14周。各組大鼠處死前

7、用代謝籠收集大鼠24小時尿液，測定24小時尿蛋白。股動脈放血分離血清測定腎功能。取部分腎組織置于4％多聚甲醛固定用于光鏡觀察及免疫組化檢測；部分腎皮質(zhì)組織用于提取腎組織總RNA和腎組織總蛋白。免疫組化檢測腎皮質(zhì)磷酸化p38蛋白激酶（p-p38MAPK）的表達特征。Western Blot檢測腎臟磷酸化和非磷酸化p38MAPK的表達水平。RT-PCR檢測大鼠腎組織中p38MAPK的mRNA含量。所有實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，用

8、SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析。組間差異用單因素方差分析（one way-ANOVA），有顯著差異者用Newman-Kuels q檢驗進行兩兩比較，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.生化指標顯示，IgA腎病組大鼠24小時尿蛋白（24hUpro）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）明顯高于對照組（P<0.01），血白蛋白明顯低于對照組（P<0.01）；氯沙坦組與IgA腎病組相比各指標均有不同程度改

9、善（P<0.05）。
　　 2.免疫細胞化學結(jié)果顯示，p-p38MAPK在對照組大鼠腎組織中有微弱表達，而在IgA腎病組的相對含量顯著增加，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01）；氯沙坦組蛋白表達較IgA腎病組降低，有顯著性差異（P<0.01）。
　　 3.Western印跡結(jié)果顯示，p38MAPK蛋白在IgA腎病組和對照組的表達無明顯差異（P>0.05）。與對照組相比，IgA腎病組大鼠腎組織中p-p38MAPK的表達

10、水平明顯升高（P<0.01）；氯沙坦組大鼠p-p38MAPK的蛋白表達較IgA腎病組明顯降低（P<0.01）。
　　 4.RT-PCR結(jié)果顯示，p38MAPK mRNA在對照組大鼠腎組織中有少量表達，IgA腎病組大鼠腎組織該蛋白表達明顯上調(diào)（P<0.01）；氯沙坦組大鼠p38MAPK mRNA表達顯著下調(diào)（P<0.01）。
　　 結(jié)論
　　 1.氯沙坦能有效的降低IgA腎病大鼠的24小時尿蛋白，并對IgA腎病大鼠

11、腎功能改善有一定的作用。
　　 2.在IgA腎病大鼠腎組織內(nèi)p38MAPK被激活，p38MAPK信號轉(zhuǎn)導途徑的激活在IgA腎病的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要的作用。
　　 3.氯沙坦能夠明顯抑制IgA腎病大鼠腎組織p38MAPK信號蛋白的表達。
　　 4.氯沙坦的腎臟保護作用可能是通過抑制p38MAPK的表達改善腎臟纖維化、延緩腎小球硬化來完成的。
　　 5.p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路抑制劑可能成為臨床治