1型糖尿病大鼠腎組織P38MAPK的表達(dá)變化及坎地沙坦的干預(yù)研究.pdf

1、目的:通過鏈脲佐菌素腹腔注射誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病大鼠腎臟P38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases，P38MAPK)和轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ，TGF-β)盼表達(dá)水平，同時(shí)給予坎地沙坦干預(yù)，探討P38MAPK、TGF-β與糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的關(guān)系，及坎地沙坦的腎臟保護(hù)作用機(jī)制。<

2、br>　　 方法:
　　 1.雄性Wistar大鼠36只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組(NC組，n=12)，糖尿病組(DM組，n=12)和坎地沙坦干預(yù)組(DM-C組，n=12)。DM組和DM-C組大鼠禁食12h后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/Kg，構(gòu)建1型糖尿病大鼠模型;3天后測(cè)大鼠隨機(jī)血糖大于16.7mmol/L為造模成功;NC組給予等容積檸檬酸緩沖液一次性腹腔注射。
　　 2.DM-C組給予坎地

3、沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，NC組和DM組給予等容積生理鹽水灌胃。干預(yù)12周末，全部大鼠置于代謝籠中收集24h尿液，并記錄尿量，用來測(cè)定尿白蛋白排泄量(urinary albumin excretion，UAE)、尿肌酐;全部大鼠稱重，留取血標(biāo)本，測(cè)空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、血肌酐、血清尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、總膽固醇(total cholesterol，TC

4、)和甘油三酯(triglycerides，TG)，計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(creatinine clearance rate，Ccr);切取右腎，去掉被膜后稱重，計(jì)算腎重指數(shù)(kidney weight index，KW/BW)，光鏡和透射電鏡下觀察腎臟病理學(xué)改變，免疫組化法觀察腎小球及腎小管p-P38MAPK和TGF-β的表達(dá)，并應(yīng)用細(xì)胞醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（CMIAS-2011）對(duì)免疫組化切片進(jìn)行分析，計(jì)算各組指標(biāo)灰度值;其余腎組織迅速置于

5、-70℃冰箱中凍存，RT-PCR檢測(cè)腎臟P38MAPK和TGF-βmRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，NC組、DM組、DM-C組分別存活12只、10只、9只大鼠。
　　 1.FBG、Ccr、BUN、UAE、KW/BW:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠FBG、Ccr、BUN、UAE、KW/BW均顯著升高（P均＜0.01）;與DM組相比，DM-C組大鼠UAE、KW/BW明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)。<

6、br>　　 2.TG、TC:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠TG、TC均顯著升高（P均＜0.01）;與DM組相比，DM-C組大鼠TG、TC明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)。
　　 3.腎臟病理形態(tài)學(xué)改變:光鏡下顯示:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠腎小球系膜細(xì)胞增生，腎小球系膜區(qū)增寬，系膜基質(zhì)增多，腎小球內(nèi)PAS陽性染色物質(zhì)增多，部分腎小管結(jié)構(gòu)紊亂;DM-C組較DM組大鼠上述病變減輕，但仍未恢復(fù)正常。透射電鏡下顯

7、示:與NC組相比，DM組大鼠腎小球基底膜不均勻增厚，部分足突出現(xiàn)斷裂、融合;DM-C組較DM組大鼠腎小球基底膜增厚程度及足突斷裂、融合程度有所減輕。
　　 4.免疫組化結(jié)果:NC組大鼠腎小球及腎小管有少量p-P38MAPK、TGF-β表達(dá)，DM組較NC組腎小球及腎小管p-P38MAPK、TGF-β表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01，P＜0.01);DM-C組較DM組腎小球及腎小管p-P38MAPK、TGF-β表達(dá)明顯減弱(P＜0.01，

8、P＜0.01)，但較NC組表達(dá)仍高(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 5.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果:NC組大鼠腎皮質(zhì)有少量P38MAPK、TGF-βmRNA的表達(dá)，DM組較NC組腎皮質(zhì)的P38MAPK、TGF-βmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01，P＜0.01);DM-C組較DM組腎皮質(zhì)P38MAPK、TGF-βmRNA表達(dá)明顯減弱(P＜0.01，P＜0.05)，但較NC組表達(dá)仍高(P＜0.01，P＜0.05)。