阿霉素腎病大鼠足細胞nephrin及podocalyxin蛋白表達及潑尼松干預的實驗研究.pdf

1、目的：觀察潑尼松對阿霉素腎病(ADN)大鼠血、尿生化指標、腎臟病理改變及腎小球足細胞nephrin和podocalyxin蛋白表達的影響，探討足細胞損傷在ADN發(fā)生發(fā)展中的作用及潑尼松對足細胞損傷的保護作用。
　　方法：24只健康雄性Wistar大鼠，適應性喂養(yǎng)3d后，隨機分為對照組(n=8)、ADN組(n=8)及潑尼松干預組(n=8)。采用小劑量間隔1周兩次尾靜脈注射阿霉素法(劑量分別為4mg/kg及3.5mg/kg)建立大鼠A

2、DN模型。于實驗第4周起，每日予潑尼松干預組潑尼松12.5mg/kg，配成水溶液灌胃，其余兩組同期予等劑量自來水灌胃，至實驗結束(第8周末)。測定各組大鼠第0周、4周、8周24小時尿蛋日(24hUP)排泄量、尿肌酐(Ucr)及血生化指標，包括血清總蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、膽固醇(Cho)、血肌酐(Scr)、尿素氮(Bun)，計算內生肌酐清除率(Ccr)；觀察各組大鼠第8周末光鏡下腎組織病理學改變，計算腎小球細胞外基質面積與腎小球

3、面積之比(ECM/GA)，評估腎臟病理積分；采用免疫組化法檢測腎小球nephrin及podocalyxin蛋白的分布及表達，并運用圖像分析軟件測定其表達的平均光密度值。應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　1.對照組、ADN組及潑尼松干預組大鼠各項生化指標變化
　　實驗4周時，ADN組、潑尼松干預組24hUP、Cho、Scr升高，Tp、Alb、Ccr降低，與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義，提示A

4、DN造模成功；實驗8周時，ADN組24hUP、Cho、Scr持續(xù)升高，Tp、Alb、Ccr繼續(xù)降低，潑尼松干預組與ADN組比較24hUP、Cho、Scr降低，Tp、Alb、Ccr升高，差異均有統(tǒng)計學意義；潑尼松干預組第8周與其第4周比較，24hUP、Cho、Scr降低，Tp、Alb升高，差異均有統(tǒng)計學意義，Ccr雖然有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　2.各組大鼠腎臟病理學改變
　　(1)光鏡下改變：對照組腎小球、腎小管結構

5、大致正常，毛細血管開放良好；ADN組可見部分腎小球囊壁增厚，并與毛細血管襻發(fā)生粘連，系膜細胞及基質中、重度增生，腎間質內可見炎細胞浸潤，腎小管擴張，管腔內可見蛋白管型；潑尼松干預組較ADN組有不同程度減輕，表現為腎小球囊壁輕度增厚，未見明顯粘連，系膜細胞僅見輕度增生，管腔內未見蛋白管型，腎間質內未見炎細胞浸潤。
　　(2)腎小球ECM/GA比值及腎臟病理積分：潑尼松干預組ECM/GA比值、腎小球病理積分、腎小管病理積分、腎臟總病理

6、積分均低于ADN組(均P<0.01)。
　　3.各組腎組織nephrin及podocalyxin蛋白的分布及表達
　　Nephrin、podocalyxin在對照組腎小球均有大量棕黃色表達，沿腎小球毛細血管襻呈連續(xù)、粗線樣分布；在ADN組腎小球僅有少量表達，棕黃色粗線樣沉積逐漸變細、變淡或消失，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.01)；潑尼松干預組與ADN組比較陽性表達增多，恢復了粗線樣沉積，差異有統(tǒng)計學意義(均P<

7、0.01)；潑尼松干預組與對照組比較陽性表達雖有減少，但差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。
　　4.相關性分析
　　ADN組腎小球nephrin蛋白表達與第8周末24hUP、Cho、ECM/GA、腎小球病理積分呈負相關(r=-0.864、-0.861、-0.909、-0.922，均P<0.01)，與Alb、腎小球podocalyxin蛋白表達呈正相關(r=0.964、0.948，均P<0.01)，與其余指標無明顯相關性；A

8、DN組腎小球podocalyxin蛋白表達與第8周末24hUP、Cho、ECM/GA、腎小球病理積分呈負相關(r=-0.801、-0.792、-0.813、-0.821，均P<0.01)，與Alb呈正相關(r=0.918，P<0.01)，與其余指標無明顯相關性。
　　結論：
　　1.小劑量間隔1周兩次尾靜脈注射阿霉素誘導法可成功復制大鼠ADN模型。
　　2.足細胞損傷與ADN蛋白尿的發(fā)生發(fā)展及腎臟病理損害的進展密切相關