巢蛋白在阿霉素腎病大鼠腎組織中的表達以及霉酚酸酯干預作用的研究.pdf

1、目的： 以阿霉素腎病大鼠建立微小病變腎病模型，以霉酚酸酯(MMF)進行干預，檢測大鼠腎組織中巢蛋白(nestin)的表達。探討足細胞損傷產(chǎn)生蛋白尿的機制以及MMF的治療作用。 方法： 雄性wistar大鼠36只，隨機分為3組：腎病組、治療組、正常組，每組12只。腎病組、治療組大鼠于實驗開始時(0天)一次性尾靜脈注射阿霉素6.5mg/kg，正常組尾靜脈注射等量生理鹽水。治療組大鼠于注藥次日開始MMF灌胃，劑量20m

2、g/(kg·d)，每日1次；腎病組、正常組大鼠每日生理鹽水灌胃。每組于第0天、7天、14天、21天、28天代謝籠留取24小時尿檢測尿蛋白排泄量，每組于14天、21天、28天各處死大鼠4只，取腎皮質(zhì)，一部分5％戊二醛固定，透射電鏡觀察足細胞變化；一部分常規(guī)4％多聚甲醛固定，做石蠟切片，HE染色光鏡觀察，免疫組化方法檢測腎組織內(nèi)nestin水平。采用MetaMorphoffline顯微圖像分析系統(tǒng)對腎小球免疫組化結(jié)果進行半定量分析，計算ne

3、stin陽性表達的相對含量。數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料用均數(shù)±標準差表示；多組資料間比較采用方差分析(One-WayANOVA)，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： ①體重：實驗開始時三組大鼠體重無顯著性差異，從第7天至觀察結(jié)束，正常組大鼠體重隨飼養(yǎng)逐漸增長，腎病組和治療組體重逐漸下降，與正常組的體重變化有顯著性差異；腎病組與治療組之間體重變化無顯著性差異。②24小時尿蛋白排泄量：實驗開始時三組大鼠

4、24小時尿蛋白排泄量無顯著性差異。從第14天開始至觀察結(jié)束，腎病組和治療組大鼠尿蛋白明顯升高，與正常組比較有顯著性差異。腎病組大鼠從14天至觀察結(jié)束尿蛋白持續(xù)增加。治療組大鼠尿蛋白始終低于腎病組，治療組尿蛋白在14天開始增加，21天達高峰，28天下降，低于21天水平。③病理改變：光鏡觀察可見腎病組大鼠腎小球結(jié)構基本正常，近曲小管上皮細胞胞質(zhì)略顯疏松；治療組與正常組相比，腎小球結(jié)構無明顯差異。電鏡觀察可見正常組大鼠腎小球濾過膜結(jié)構完整，上

5、皮細胞足突清晰。腎病組大鼠腎小球上皮細胞足突廣泛融合，基底膜正常。治療組大鼠腎小球上皮細胞足突部分融合，但病變較輕。④nestin表達相對含量：免疫組化結(jié)果提示從第14天開始，腎病組和治療組大鼠nestin表達明顯增加，與正常組比較有顯著性差異。治療組大鼠nestin表達低于腎病組，有顯著性差異。⑤經(jīng)Pearson相關分析顯示，大鼠腎小球nestin陽性表達量與大鼠24小時尿蛋白排泄量呈正相關。 結(jié)論： 腎小球足細胞損傷