依維莫司在糖尿病小鼠模型中治療糖尿病腎病的效果優(yōu)于雷帕霉素.pdf

1、第一部分依維莫司對高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
　　 目的：觀察依維莫司對高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞（HBZY-1）凋亡的保護(hù)作用，并探討其意義。
　　 方法：收培養(yǎng)HBZY-1細(xì)胞分組：處理72h后，用磺酰羅丹明B法測量細(xì)胞OD 值計算各組細(xì)胞存活率，用Annexin V和PI 雙標(biāo)法檢測各組細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：30mM 葡萄糖處理的細(xì)胞存活率明顯降低，凋亡率明顯增加。不同濃度依維莫司均能提高細(xì)胞存活

2、率，其中以200ng/ml依維莫司效果最好；同時200ng/ml 依維莫司具有明顯抗HBZY-1細(xì)胞凋亡作用。
　　 結(jié)論：依維莫司對高糖誘導(dǎo)HBZY-1細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用，從而為其治療糖尿病腎病提供新的研究方向。
　　 第二部分新一代免疫抑制劑依維莫司對db/db 小鼠的腎臟保護(hù)作用
　　 目的：觀察mTOR 抑制劑依維莫司對糖尿病腎病的保護(hù)作用。
　　 方法：12只db/m 非糖尿病小鼠和12只db

3、/db 糖尿病小鼠隨機(jī)分為四組，每組6只。分別為db/m 小鼠；db/m 小鼠加依維莫司；db/db 小鼠；db/db 小鼠加依維莫司。依維莫司治療劑量為2mg ?kg-1 ?day-1，給藥時間8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，眶后靜脈叢取血用于生化檢查。小鼠腎臟用于組織學(xué)檢查。
　　 結(jié)果：糖尿病小鼠血肌酐、尿素氮和腎小球面積、腎臟重量都明顯高于非糖尿病小鼠，且腎小球系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)也明顯增多。接受依維莫司治療的糖尿病小鼠，上述指標(biāo)均改善。

4、
　　 結(jié)論：依維莫司能夠延緩糖尿病腎病的進(jìn)展。
　　 第三部分依維莫司在糖尿病小鼠模型中治療糖尿病腎病的效果優(yōu)于雷帕霉素
　　 目的：為了對比依維莫司和雷帕霉素治療糖尿病腎病的效果。
　　 方法：八周鼠齡的糖尿病小鼠 (db/db)分別給予依維莫司 2mg/kg/day或者雷帕霉素 2mg/kg/day 灌胃四周或者十二周。血漿和二十四小時尿樣被收集起來用作生化檢測。每只小鼠的一只腎臟被勻漿用作蛋白質(zhì)檢

5、測，另一只腎臟用作病理學(xué)檢測。用ELISA和 Western blot的方法分別檢測糖尿病小鼠腎臟組織中和培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長因子β1和磷酸化p70S6 蛋白激酶的表達(dá)。
　　 結(jié)果：依維莫司在改善腎臟功能和腎小球肥大以及減輕系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)的堆積和擴(kuò)張方面的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于雷帕霉素。然而，在同等劑量下，依維莫司體外抑制mTOR 通路的效果比雷帕霉素遜色。
　　 結(jié)論：依維莫司在體內(nèi)治療糖尿病腎臟的效果優(yōu)于雷帕