雷帕霉素對(duì)大鼠肝臟冷缺血再灌注肺損傷的影響.pdf

1、目的:探討雷帕霉素對(duì)大鼠肝臟冷缺血再灌注肺損傷的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:健康雄性SD大鼠24只，8～10周齡，體重220～250 g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組（S組）大鼠僅接受麻醉后開(kāi)腹，游離肝葉及相關(guān)血管后關(guān)腹;模型對(duì)照組（C組）大鼠采用肝臟冷缺血再灌注模型，分別采用門(mén)靜脈插管和肝下下腔靜脈缺口作為灌注道和流出道，于腸系膜上靜脈上方和右腎靜脈上方阻斷門(mén)靜脈及肝下下腔靜脈，同時(shí)阻斷肝上下腔靜脈，用4℃乳酸林

2、格氏液經(jīng)門(mén)靜脈插管灌注肝臟，用吸引器及時(shí)吸凈肝下下腔靜脈缺口流出的血和灌注液，灌注過(guò)程中將包有紗布的冰塊置于肝臟表面維持低溫,20 min后隨即恢復(fù)肝臟血液灌注，沖洗腹腔后關(guān)腹;雷帕霉素組（R組）大鼠術(shù)前2w連續(xù)給予1 mg/kg/d雷帕霉素灌胃，手術(shù)操作同C組。于再灌注12 h時(shí)抽取下腔靜脈血樣，采用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)測(cè)定血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6（IL-6）濃度。切取肺，取部分肺制成肺組織勻漿，

3、測(cè)定肺組織內(nèi)丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。一部分肺組織分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA及哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平。另取部分肺組織用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切成4μm薄片，行蘇木素-伊紅(HE)染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理學(xué)結(jié)果。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS1

4、7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:與S組相比，C、R組血清中TNF-α、IL-6的濃度均升高(P＜0.05)，肺組織勻漿MDA、NO的含量升高及iNOS mRNA的表達(dá)上調(diào)，mTOR蛋白量表達(dá)增多，SOD活性降低（P＜0.05）;與C組相比，R組血清中TNF-α、IL-6的濃度均降低(P＜0.05)，肺組織勻漿MDA、NO的含量降低及iN

5、OS mRNA的表達(dá)下調(diào)，mTOR蛋白量表達(dá)減少，SOD活性升高(P＜0.05)。光鏡下S組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變，C組可見(jiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡大小不一，肺泡間隔增寬，大量紅細(xì)胞滲出，毛細(xì)血管充血;R組損傷較輕，僅見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肺泡間隔增寬。
　　結(jié)論:1.大鼠肝臟冷缺血再灌注損傷能激活mTOR信號(hào)通路，恢復(fù)血流灌注后損傷明顯，氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)及mTOR信號(hào)通路的激活在肝臟冷缺血再灌注肺損傷的發(fā)生過(guò)程中起