白術(shù)多糖對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分白術(shù)多糖對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
　　 目的：
　　 本實驗參照Ohmori等建立的70％大鼠肝臟缺血再灌注模型并在此基礎(chǔ)上，對模型大鼠術(shù)前予白術(shù)多糖(Atractylodes Macrocephalaon Polysaccharide，AMP)預(yù)處理，通過對術(shù)后不同時間段肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能的變化以及相關(guān)炎癥因子的表達(dá)及其相互關(guān)系等的研究，觀察大鼠肝臟缺血再灌注損傷后肝細(xì)胞顯微和超微結(jié)構(gòu)的變化，檢測肝組織

2、中ICAM-1 mRNA、IL-1等的表達(dá)，探討白術(shù)多糖對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。從而為臨床減輕肝臟缺血再灌注損傷提供理論依據(jù)和可能的技術(shù)路徑。
　　 方法：
　　 1實驗分組：54只健康SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組18只，每個時間段6只。假手術(shù)組(Sham組)：大鼠麻醉成功后，取上腹部正中切口進(jìn)腹，分離肝門后縫合關(guān)腹；缺血再灌注組(HIRI組)：大鼠麻醉成功后行肝臟缺血再灌注手術(shù)；白術(shù)多糖預(yù)處理缺血再灌注組(A

3、MP組)：手術(shù)前兩周給予白術(shù)多糖(按30 mg/kg給藥)灌胃，每天一次，大鼠麻醉成功后行肝臟缺血再灌注手術(shù)。
　　 2比較大鼠缺血再灌注損傷后48h內(nèi)的指標(biāo)變化：分別于缺血60min后再灌注1h、6h、24h后切取肝左外葉及抽取下腔靜脈血作為標(biāo)本，檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，肝組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，Western blot分析肝組織中IL-1蛋白的表達(dá)情況，RT-PCR技術(shù)

4、檢測肝組織中ICAM-1 mRNA的表達(dá)情況，觀察肝細(xì)胞顯微和超微結(jié)構(gòu)的改變情況。
　　 結(jié)果：
　　 1手術(shù)成功的標(biāo)準(zhǔn)是手術(shù)結(jié)束后，大鼠即刻蘇醒，翻身，并能維持有效呼吸、心跳。
　　 2血清ALT和AST水平的變化：血清ALT水平是臨床反映肝細(xì)胞損傷和壞死程度的敏感指標(biāo)，與Sham組比較，HIRI組以及AMP組的血清ALT和AST水平顯著升高(P<0.05)，血清轉(zhuǎn)氨酶水平在再灌注6h達(dá)到高峰，然后逐漸下降，再

5、灌注24h時血清ALT和AST水平均有所恢復(fù)。AMP組與HIRI組比較，血清ALT和AST水平顯著降低(P<0.05)。
　　 3肝組織MDA、SOD水平的變化：MDA能反映細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷的程度；氧自由基清除劑SOD，可以間接反映體內(nèi)氧自由基水平及脂質(zhì)過氧化的損傷程度。與Sham組比較，HIRI組以及AMP組的肝組織MDA水平升高，SOD水平降低，差異具有顯著性(P<0.05)；AMP組與HIRI組比較

6、，肝組織MDA水平顯著降低、SOD水平顯著升高，差異具有顯著性(P<0.05)。
　　 4肝組織中IL-1蛋白表達(dá)：HIRI組和AMP組IL-1蛋白的表達(dá)較Sham組顯著升高(P<0.05)。與HIRI組比較，AMP組IL-1蛋白的表達(dá)顯著下降(P<0.05)。隨時間延長其表達(dá)程度逐漸降低。
　　 5肝組織中ICAM-1 mRNA含量：HIRI組和AMP組ICAM-1 mRNA含量較Sham組顯著升高(P<0.05)。A

7、MP組ICAM-1 mRNA的含量較HIRI組顯著下降(P<0.05)。隨時間延長其增加幅度逐漸降低。
　　 6肝組織HE染色觀察：Sham組肝臟細(xì)胞形態(tài)正常，肝小葉、中央靜脈、匯管區(qū)結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索排列整齊。術(shù)后1h可見HIRI組中央靜脈周圍肝細(xì)胞輕度腫脹，但未見明顯肝細(xì)胞變性壞死；AMP組肝細(xì)胞無明顯損傷；6h可見HIRI組中央靜脈周圍肝細(xì)胞中重度水腫，局部可見氣球樣變性，肝血竇明顯變窄、淤血，匯管區(qū)周圍肝細(xì)胞重度水腫，可

8、見較多炎性細(xì)胞浸潤，AMP組肝細(xì)胞輕度水腫，未見明顯肝細(xì)胞變性、壞死；24h后HIRI組可見肝細(xì)胞淤血水腫比1h、6h組好轉(zhuǎn)，可見部分肝細(xì)胞發(fā)生凝固性壞死，AMP組肝細(xì)胞形態(tài)基本正常，肝細(xì)胞僅表現(xiàn)輕度水腫。
　　 7各組肝組織超微結(jié)構(gòu)的變化
　　 7.1肝細(xì)胞在電鏡下的變化：HIRI組：1h時段的肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)未見明顯改變；6h時段肝細(xì)胞開始發(fā)生濃縮，細(xì)胞間隙變大，電子密度增高，細(xì)胞核皺縮變形，染色質(zhì)粗糙，核仁濃縮甚至裂

9、解，細(xì)胞器明顯密集化；24h時段肝細(xì)胞呈現(xiàn)固縮死亡的形態(tài)，染色質(zhì)邊集，少數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體。與HIRI組相比，AMP組各時段的肝細(xì)胞未見有明顯的凋亡形態(tài)。
　　 7.2線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化：HIRI組各時段線粒體腫脹明顯，膜模糊不清，部分膜破裂，線粒體嵴疏松溶解，有大量空泡形成；AMP組線粒體結(jié)構(gòu)基本正常，僅有輕度腫脹，線粒體排列整齊，膜基本完整，線粒體嵴密集，無空泡形成。
　　 結(jié)論：
　　 本實驗結(jié)果提示

10、ICAM-1的上調(diào)參與肝臟缺血再灌注損傷早期的炎癥反應(yīng)，加重肝臟損傷，可見缺血再灌注大鼠炎癥因子IL-1的表達(dá)隨著再灌注時間的延長而逐漸升高，ICAM-1也明顯增加。而白術(shù)多糖可抑制缺血再灌注損傷大鼠肝臟IL-1過表達(dá)，并進(jìn)一步抑制肝臟中ICAM-1的表達(dá)，減少缺血再灌注大鼠肝臟氧自由基的生成，通過降低MDA水平來降低肝細(xì)胞線粒體脂質(zhì)過氧化損傷，并增強(qiáng)肝細(xì)胞清除氧自由基的能力從而調(diào)節(jié)線粒體功能，最終影響肝臟功能。這對防止或減少肝臟缺血再