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文檔簡介
1、第一部分
鳶尾苷元對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
研究目的:
肝臟缺血再灌注損傷(hepatic ischemia and reperfusion injury, HIRI)是肝移植和某些需要阻斷肝門血流手術(shù)過程中發(fā)生的一種病理過程,它可以造成移植物早期失功能,最后影響手術(shù)成功。由于供肝短缺,邊緣性供肝越來越多地用于臨床。由于邊緣性供肝對缺血缺氧耐受性差,所以,對于邊緣性供肝來說,如何減少缺
2、血再灌注損傷尤為重要。中藥由于其副作用少,作用靶點多,是干預(yù)肝臟缺血再灌注損傷的研究熱點之一。很多中藥已經(jīng)被研究證實具有減輕肝臟缺血再灌注損傷的作用。鳶尾苷元是一種二氫異黃酮,研究證實鳶尾苷元具有較強(qiáng)的抗氧化作用,具有減輕對CCl4和H2O2誘導(dǎo)的肝臟損傷作用,高濃度的鳶尾苷元還能促進(jìn)體外培養(yǎng)的肝星形細(xì)胞的凋亡,從而抑制肝臟纖維化的作用。本實驗研究目的是了解鳶尾苷元對肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用和相關(guān)的研究。
研究方法:
3、r> 方法:SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=6):假手術(shù)組(SM)、模型組(IR)、溶媒組(DMSO)、鳶尾苷元小劑量(T25mg/kg,T25)和鳶尾苷元大劑量(T50mg/kg,T50)組。缺血前48h,24h和缺血前1h,分別于鳶尾苷元干預(yù)組大鼠腹腔內(nèi)注射25mg/kg和50mg/kg的鳶尾苷元,其他各組分別注射等體積生理鹽水和DMSO溶液。本實驗用Yoshizumi等方法建立肝左、中葉70%部分肝缺血再灌注模型。再灌注4小時后各
4、實驗組采集血液和肝臟組織樣本。檢測血清中ALT活性作為肝功能損傷的指標(biāo),同時用ELISA法檢測肝組織中MPO、SOD、XOD、GSH-Px、MDA、NO和iNOS含量。以及檢測血液TNF-α,ICAM-1和IL-1O的含量和肝臟組織TNF-αmRNA,ICAM-1mRNA和IL-1OmRNA的表達(dá)情況,同時檢測肝臟組織中NF-κB的蛋白表達(dá)情況。
研究結(jié)果:
大鼠缺血60min,再灌注后ALT的峰值出現(xiàn)在再灌
5、注后4h,所以選擇再灌注后4h的標(biāo)本作為檢測標(biāo)本。與IR和DMSO組相比,小、大劑量鳶尾苷元干預(yù)組血清ALT含量均明顯下降(P<0.01),鳶尾苷元大劑量干預(yù)組較小劑量組血ALT濃度下降更明顯(p<0.05);鳶尾苷元干預(yù)組肝臟組織病理學(xué)表現(xiàn)明顯改善,且與ALT水平一致;鳶尾苷元干預(yù)后肝組織MPO、MDA、XOD含量較模型對照組(IR)和DMSO明顯下降;而SOD和GSH-Px含量則明顯上升;同時鳶尾苷元干預(yù)組肝臟組織中NO含量明顯下降
6、和iNOS的活性明顯降低,且呈劑量相關(guān)性。(p<0.05)。鳶尾苷元干預(yù)組血炎癥因子TNF-α,ICAM-1較IR組和DMSO組明顯降低,肝臟組織TNF-α mRNA,ICAM-1mRNA的表達(dá)較IR組和DMSO組明顯降低,與血清TNF-α,ICAM-1一致。鳶尾苷元干預(yù)組肝臟NF-κB蛋白較IR組和DMSO組明顯降低。鳶尾苷元干預(yù)組血抗炎因子IL-10較IR組和DMSO組明顯升高,肝臟組織中IL-10mRNA的表達(dá)較IR組和DMSO組
7、明顯增強(qiáng)。
研究結(jié)論:
1、鳶尾苷元干預(yù)能有效改善大鼠肝臟部分熱缺血再灌注損傷引起的肝功能和肝臟病理損害;
2、鳶尾苷元能減少大鼠肝臟缺血再灌注后氧自由基的產(chǎn)生,減輕脂質(zhì)過氧化引發(fā)的組織損傷和促進(jìn)內(nèi)源性抗氧化酶活性增強(qiáng)。同時它能減少肝臟缺血再灌注后活性氮的產(chǎn)生;
3、鳶尾苷元干預(yù)能夠減輕大鼠肝臟熱缺血再灌注損傷后中性粒細(xì)胞的聚集浸潤和活化,減輕炎癥因子的活化和增強(qiáng)抗炎因子水平,從而
8、減輕肝臟組織炎癥反應(yīng)。
第二部分
鳶尾苷元對大鼠缺血再灌注肝臟Bcl-2和Caspase-3表達(dá)的影響
研究目的:
肝缺血再灌注損傷是臨床肝臟外科手術(shù)常見的病理生理現(xiàn)象,可發(fā)生在休克、肝移植、肝部分切除以及其它一些需要肝門阻斷等外科手術(shù)過程中,可導(dǎo)致原發(fā)性移植物的無功能和手術(shù)失敗。過去一直認(rèn)為肝缺血再灌注損傷只出現(xiàn)細(xì)胞壞死,壞死是肝臟缺血再灌注細(xì)胞損傷的典型表現(xiàn),但是隨著研究的深入
9、,缺血再灌注肝臟組織中也可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡,而且人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡明顯增多是造成器官功能不全的重要原因,并且在缺血再灌注早期,肝損傷以肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡為主,肝實質(zhì)細(xì)胞凋亡還可引發(fā)肝臟組織細(xì)胞一系列壞死性改變。
肝臟缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡的機(jī)理尚不清楚,許多研究證實線粒體通路在肝臟細(xì)胞凋亡中起著非常重要的作用。可能在缺血缺氧過程中,線粒體通透性改變誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。各種因素造成細(xì)胞內(nèi)鈣超載導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,氧自由基直接損傷DNA,導(dǎo)
10、致蛋白質(zhì)交聯(lián),使得具有酶活性的蛋白質(zhì)功能喪失,改變細(xì)胞的表型特征而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。許多研究表明,細(xì)胞凋亡的發(fā)生主要受凋亡相關(guān)基因和酶的調(diào)控,這些基因和酶包括起誘導(dǎo)作用的如Caspase家族的酶類和起抑制作用的如bcl-2等,這些促凋亡因素和抑制凋亡因素相互作用,決定了凋亡的啟動和抑制。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)鳶尾苷元對t-BHP(tert-butyl hyperoxide)誘導(dǎo)的肝HepG2細(xì)胞損傷有明顯的保護(hù)作用,在用t-BHP誘導(dǎo)的HepG2細(xì)
11、胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有Caspase-3前體物質(zhì)活化和DNA片段的出現(xiàn),但是上述現(xiàn)象能被鳶尾苷元所抑制,所以作者推測鳶尾苷元可能通過抑制凋亡等途徑對由t-BHP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞具有保護(hù)作用。本實驗通過建立70%肝臟缺血再灌注損傷模型,了解鳶尾苷元對缺血再灌注肝臟細(xì)胞凋亡的影響。
研究方法:
方法:SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=6):假手術(shù)組(SM)、模型組(IR)、溶媒組(DMSO)、鳶尾苷元小劑量(T25)和鳶尾苷元大劑量(T
12、50)組。缺血前48h,24h和1h干預(yù)組大鼠腹腔內(nèi)注射25mg/kg和50mg/kg的鳶尾苷元,其他組分別注射等體積生理鹽水或DMSO。建立肝左、中葉70%部分肝缺血再灌注模型。再灌注4小時后各實驗組采集血液和肝臟組織樣本。Tunnel法檢測各組肝臟細(xì)胞凋亡情況以及檢測肝臟組織中Bcl-2mRNA和Caspase-3mRNA表達(dá)情況和Bcl-2和Caspase-3蛋白在肝臟組織中的表達(dá)情況。
研究結(jié)果:
與
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