黃岑苷對大鼠腎臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)過程導(dǎo)致腎臟移植中不可避免的急性損傷。再灌注后的炎癥反應(yīng)和繼發(fā)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，是該損傷中重要的病理生理變化。作為從中國傳統(tǒng)中藥黃岑中提取的一種結(jié)構(gòu)已知的有效成分，黃岑苷(baicalin，B)已被證明具有多種生物學(xué)保護(hù)作用，如抗病毒，抗感染，抗炎，抗凋亡等，并已在臨床上廣泛應(yīng)用。但目前尚無實(shí)驗(yàn)證實(shí)黃岑苷在腎臟缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用及機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠腎臟IR模

2、型探討黃岑苷對腎臟缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法:雄性Wistar大鼠200-250g共30只，隨機(jī)分為五組，每組六只，包括假手術(shù)組（Sham組），缺血再灌注損傷組（IR組），以及低劑量黃岑苷處理組(1mg/kgB組)、中等劑量黃岑苷處理組（10mg/kg B組）、大劑量黃岑苷處理組(100mg/kgB組)。Wistar大鼠通過右側(cè)腎臟切除，左側(cè)腎蒂夾

3、閉45分鐘再開放建立腎臟IRI模型。Sham組僅進(jìn)行開腹關(guān)腹操作，IR組僅建立腎臟IRI模型，各黃芩處理組在建立腎臟IRI模型基礎(chǔ)上加不同劑量黃岑苷治療。黃岑苷溶于生理鹽水后在腎蒂夾閉前30分鐘時(shí)行腹腔注射，黃芩苷劑量分別為1mg/kg、10mg/kg和100mg/kg。術(shù)后24小時(shí)處死大鼠，留取血液、腎組織福爾馬林固定標(biāo)本、腎組織液氮冰凍標(biāo)本。其中血標(biāo)本行腎功能檢測（肌酐與尿素氮），腎臟福爾馬林固定標(biāo)本行組織切片HE染色及TUNEL檢

4、測，腎臟冰凍標(biāo)本提取蛋白及RNA，分別行caspase3活性檢測、western blot蛋白表達(dá)檢測、實(shí)時(shí)定量PCR檢測。其中蛋白檢測指標(biāo)包括caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、bcl-2、bax、NF-κB、IκB、磷酸化NF-κB、磷酸化IκB，RNA檢測指標(biāo)包括IL-1β、IL-6及TNF-α的信使RNA。
　　結(jié)果:與IR組相比，10mg/kg B組及100mg/kg B組腎臟功能

5、明顯改善，肌酐(79.67±8.71μmol/L,47.17±6.05μmol/L,39.00±6.16μmol/L，均p＜0.001)及尿素氮（22.37±3.87mmol/L，16.18±0.71 mmol/L，12.15±0.78 mmol/L，分別p＜0.01和p＜0.001）均顯著下降。該兩組腎組織HE染色與IR組相比可見腎臟損傷程度明顯減輕，僅有少量管型，輕度炎癥反應(yīng)及小管水腫，HE評分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（2.83±0.12，2.

6、58±0.12，2.32±0.17，分別p＜0.01和p＜0.001）。TUNEL檢測示兩組小管上皮細(xì)胞凋亡數(shù)較IR組明顯減少，半定量分析見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（6.75±0.91，3.87±0.67，3.43±0.85，均p＜0.001）。對炎癥相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測，實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果示該兩組黃岑苷治療后IRI相關(guān)炎癥因子IL-1β(55.35±4.12,19.03±0.95,12.27±1.50，均p＜0.001), IL-6(24.92±5.8

7、0,4.29±0.59,3.08±0.61，均p＜0.001), TNF-α(18.73±4.49,1.67±0.23,1.75±0.41，均p＜0.001)表達(dá)顯著降低;western blot結(jié)果進(jìn)一步證明重要炎癥反應(yīng)通路NF-κB通路被抑制，磷酸化蛋白NF-κ B及磷酸化蛋白IκB水平明顯降低。對凋亡相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測，該兩組caspase-3活性顯著降低(0.33±0.02,0.25±0.01,0.22±0.01，均p＜0.001

8、)，蛋白caspase-3、cleavedcaspase-3、bax表達(dá)減少，蛋白bcl-2表達(dá)增加。
　　結(jié)論:黃岑苷對大鼠腎臟IRI具有顯著保護(hù)作用。該作用與黃岑苷減輕IRI相關(guān)炎癥因子表達(dá)及抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡有關(guān)。NF-κB信號通路作為腎臟IRI中重要的炎癥激活通路，在黃岑苷處理后被明顯抑制。線粒體相關(guān)凋亡作為腎臟IRI中腎小管上皮細(xì)胞凋亡的主要途徑，在黃岑苷處理后也得到明顯抑制。因此黃岑苷對大鼠缺血再灌注損傷的保護(hù)作用