靈芝多糖肽對大鼠心肌細胞缺血再灌注損傷的保護作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立大鼠離體心肌缺血再灌注模型,探討靈芝多糖肽對離體心肌缺血再灌注的保護作用及機理。
  方法:雄性SD大鼠42只,取心臟Langendorff法離體灌流,實驗分七組(n=6):①正常組:修正洛氏液連續(xù)灌流110 min;②模型組:修正洛氏液穩(wěn)定灌流20 min后停灌30 min,復(fù)灌修正洛氏液60 min;③GLPP給藥組:修正洛氏液穩(wěn)定灌流20 min后停灌30 min,復(fù)灌液中分別加入不同濃度的GLPP(6.25、12

2、.5、25、50、100 mg·L-1)灌流60 min。實驗過程實時監(jiān)測心率(HR,min-1)、心臟張力(Tmin,g)、收縮幅度(△T,g)、最大收縮速度(+dT/dtmax,g·s-1)、最大舒張速度(-dT/dtmax,g·s-1)、冠脈流量(CF,d·min-1)反應(yīng)心功能。實驗結(jié)束,留取心室肌光鏡觀察心肌組織學(xué)結(jié)構(gòu)、電鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu),TUNEL檢測心肌細胞凋亡,Western blot檢測心肌細胞Caspase-3

3、的活性。
  結(jié)果:1.心搏曲線
  在心臟缺血再灌注期間,模型組收縮力減弱,心率減慢,出現(xiàn)心律失常;給藥組收縮力增強,心率增快,節(jié)律整齊。
  2.各項參數(shù)
  2.1.心肌張力
  模型組在缺血20 min后張力增加,對照組和模型組在缺血20 min時的張力分別為(1.06±0.11)﹑(1.57±0.11)g(P<0.05),給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1可使張力降低,再灌注20﹑30

4、﹑40﹑50 min時作用更明顯,GLPP50 mg·L-1再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時心肌張力分別為(1.12±0.12)、(1.13±0.08)、(1.11±0.09)﹑(1.10±0.08)g(P<0.05)。
  2.2.心肌收縮力
  模型組再灌注后心肌收縮力明顯降低,再灌注20﹑30﹑40 min時最明顯。對照組和模型組再灌注20﹑30﹑40 min時的心肌收縮力分別為(4.46±0.27)﹑(2.51

5、±0.39)g(P<0.01);(4.18±0.37)﹑(2.47±0.13)g(P<0.01);(3.93±0.41)﹑(2.19±0.8)g(P<0.01),給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1組均能使再灌注后的心肌收縮力增強, GLPP25、50 mg·L-1組作用更明顯,GLPP25 mg· L-1再灌注20﹑30﹑40 min時心肌收縮力分別為(4.71±0.33)、(4.74±0.37)﹑(4.44±0.33)g(

6、P<0.01)。
  2.3.心率
  模型組再灌注后心率減少,再灌注40、50 min時心率減少明顯。對照組和模型組再灌注40、50 min時的心率分別為(161±11)﹑(129±10)min-1(P<0.05);(154±13)﹑(145±11)min-1(P<0.05),給藥組GLPP6.25、12.5、100 mg·L-1使心率增快,再灌注40﹑50 min時心率增快明顯,GLPP12.5 mg·L-1組復(fù)灌40﹑

7、50 min時心率分別為(175±14)﹑(170±10)min-1(P<0.05)。
  2.4.最大收縮速度
  模型組再灌注后最大收縮速度減小,再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時減少明顯。對照組和模型組在再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時的最大收縮速度分別為(147±12)﹑(99±2)g·s-1(P<0.05);(147±15)﹑(94±8)g·s-1(P<0.05);(144±10)、(93±14)g·s-

8、1(P<0.05);(128±8)﹑(84±12)g·s-1(P<0.05),給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1在再灌注20﹑30﹑40﹑50 min均能使最大收縮速度增大,GLPP50 mg·L-1再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時最大收縮速度分別為(171±17)﹑(175±11)﹑(171±17)﹑(161±14)﹑(139±9)g·s-1(P<0.01)。
  2.5.最大舒張速度
  模型組再灌注后

9、最大舒張速度減慢,再灌注20、30 min時最為明顯有差別。對照組和模型組在再灌注20、30 min時最大舒張速度分別為(-104±8)﹑(-62±22)g·s-1(P<0.05);(-94±28)﹑(-64±25)g·s-1(P<0.05),給藥組GLPP25 mg·L-1再灌注30﹑40﹑50﹑60 min均能加快心臟的最大舒張速度,分別為(-109±1)﹑(-105±3)﹑(-99±4)﹑(-88±8)g·s-1(P<0.01),

10、GLPP50、100 mg·L-1組對心臟最大舒張速度沒有明顯影響(P>0.05)。
  2.6.冠脈流量
  模型組再灌注后冠脈流量減少,再灌注20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時作用明顯。對照組和模型組再灌注20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時冠脈流量分別為(184±12)﹑(140±2)d·min-1(P<0.05);(182±2)﹑(120±2)d·min-1(P<0.01);(170±8)﹑(105±9)d·m

11、in-1(P<0.01);(167±12)﹑(102±8)d·min-1(P<0.01);(163±5)﹑(92±3)d·min-1(P<0.01),給藥組GLPP25、50、100 mg· L-1均能使再灌注后的冠脈流量明顯增加,GLPP50 mg·L-1復(fù)灌20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時冠脈流量分別為(163±5)﹑(152±5)﹑(144±3)﹑(140±2)﹑(114±6)d·min-1(P<0.01)。
  3.

12、心肌組織學(xué)結(jié)構(gòu)
  HE染色后光鏡下可見缺血再灌注組心肌細胞肌纖維排列紊亂,部分肌纖維溶解液化,胞核固縮,間質(zhì)水腫,炎癥細胞浸潤。給藥組(GLPP25、100 mg·L-1)心肌細胞纖維排列較整齊,胞核結(jié)構(gòu)尚清晰,間質(zhì)輕度水腫,炎癥細胞浸潤較少。
  4.心肌細胞超微結(jié)構(gòu)
  電鏡可見缺血再灌注組心肌細胞胞漿凝縮,心肌纖維變模糊,排列紊亂,肌絲、肌節(jié)斷裂溶解;線粒體大量增生,分布紊亂,腫脹變形,有空泡形成;細胞核固縮,

13、核染色質(zhì)濃集。給藥組(GLPP25、100 mg·L-1)心肌細胞肌原纖維排列整齊規(guī)則,線粒體較多,嵴密集,無腫脹和空泡樣變性;細胞核無變形,核膜完整,異染色體和常染色體清晰可見。
  5.細胞凋亡的測定
  Tunne l檢測顯示正常組心肌細胞凋亡率為(2.1±1.1)%,模型組的細胞凋亡率為(34.8±2.9)%,給藥組(GLPP6.25﹑25、100 mg·L-1)細胞凋亡率分別為(32.4±1.1)%(P>0.05)

14、、(12.6±2.2)%(P<0.05)、(10.2±1.8)%(P<0.05)。
  6.Caspase-3的活性測定
  Western blot檢測結(jié)果顯示,模型組Cleaved Caspase-3蛋白的表達明顯增加,給藥組GLPP25、100mg·L-1能明顯減少Cleaved Caspase-3蛋白的表達。
  結(jié)論:1.靈芝多糖肽可以保護離體心肌缺血再灌注損傷后的心臟功能。
  2.靈芝多糖肽可以保護

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