靈芝多糖肽對大鼠心肌細胞缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、目的：建立大鼠離體心肌缺血再灌注模型，探討靈芝多糖肽對離體心肌缺血再灌注的保護作用及機理。
　　方法：雄性SD大鼠42只，取心臟Langendorff法離體灌流，實驗分七組（n=6）:①正常組：修正洛氏液連續(xù)灌流110 min；②模型組：修正洛氏液穩(wěn)定灌流20 min后停灌30 min，復(fù)灌修正洛氏液60 min；③GLPP給藥組：修正洛氏液穩(wěn)定灌流20 min后停灌30 min，復(fù)灌液中分別加入不同濃度的GLPP（6.25、12

2、.5、25、50、100 mg·L-1）灌流60 min。實驗過程實時監(jiān)測心率（HR，min-1）、心臟張力（Tmin,g）、收縮幅度（△T，g）、最大收縮速度（+dT/dtmax，g·s-1）、最大舒張速度（-dT/dtmax,g·s-1）、冠脈流量（CF,d·min-1）反應(yīng)心功能。實驗結(jié)束，留取心室肌光鏡觀察心肌組織學(xué)結(jié)構(gòu)、電鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu),TUNEL檢測心肌細胞凋亡，Western blot檢測心肌細胞Caspase-3

3、的活性。
　　結(jié)果：1.心搏曲線
　　在心臟缺血再灌注期間，模型組收縮力減弱，心率減慢，出現(xiàn)心律失常；給藥組收縮力增強，心率增快，節(jié)律整齊。
　　2.各項參數(shù)
　　2.1.心肌張力
　　模型組在缺血20 min后張力增加，對照組和模型組在缺血20 min時的張力分別為（1.06±0.11）﹑(1.57±0.11)g（P<0.05），給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1可使張力降低，再灌注20﹑30

4、﹑40﹑50 min時作用更明顯，GLPP50 mg·L-1再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時心肌張力分別為(1.12±0.12)、(1.13±0.08)、（1.11±0.09）﹑(1.10±0.08)g（P<0.05）。
　　2.2.心肌收縮力
　　模型組再灌注后心肌收縮力明顯降低，再灌注20﹑30﹑40 min時最明顯。對照組和模型組再灌注20﹑30﹑40 min時的心肌收縮力分別為（4.46±0.27）﹑（2.51

5、±0.39）g（P<0.01）；（4.18±0.37）﹑（2.47±0.13）g（P<0.01）；（3.93±0.41）﹑（2.19±0.8）g（P<0.01），給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1組均能使再灌注后的心肌收縮力增強， GLPP25、50 mg·L-1組作用更明顯，GLPP25 mg· L-1再灌注20﹑30﹑40 min時心肌收縮力分別為（4.71±0.33）、（4.74±0.37）﹑（4.44±0.33）g（

6、P<0.01）。
　　2.3.心率
　　模型組再灌注后心率減少，再灌注40、50 min時心率減少明顯。對照組和模型組再灌注40、50 min時的心率分別為（161±11）﹑（129±10）min-1（P<0.05）；（154±13）﹑(145±11)min-1（P<0.05），給藥組GLPP6.25、12.5、100 mg·L-1使心率增快，再灌注40﹑50 min時心率增快明顯，GLPP12.5 mg·L-1組復(fù)灌40﹑

7、50 min時心率分別為（175±14）﹑（170±10）min-1（P<0.05）。
　　2.4.最大收縮速度
　　模型組再灌注后最大收縮速度減小，再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時減少明顯。對照組和模型組在再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時的最大收縮速度分別為(147±12)﹑（99±2）g·s-1（P<0.05）;(147±15)﹑（94±8）g·s-1（P<0.05）；(144±10)、（93±14）g·s-

8、1（P<0.05）;（128±8）﹑(84±12)g·s-1（P<0.05），給藥組GLPP25、50、100 mg·L-1在再灌注20﹑30﹑40﹑50 min均能使最大收縮速度增大，GLPP50 mg·L-1再灌注20﹑30﹑40﹑50 min時最大收縮速度分別為（171±17）﹑（175±11）﹑（171±17）﹑（161±14）﹑（139±9）g·s-1（P<0.01）。
　　2.5.最大舒張速度
　　模型組再灌注后

9、最大舒張速度減慢，再灌注20、30 min時最為明顯有差別。對照組和模型組在再灌注20、30 min時最大舒張速度分別為（-104±8）﹑（-62±22）g·s-1（P<0.05）；（-94±28）﹑（-64±25）g·s-1（P<0.05），給藥組GLPP25 mg·L-1再灌注30﹑40﹑50﹑60 min均能加快心臟的最大舒張速度，分別為（-109±1）﹑（-105±3）﹑（-99±4）﹑（-88±8）g·s-1（P<0.01）,

10、GLPP50、100 mg·L-1組對心臟最大舒張速度沒有明顯影響（P>0.05）。
　　2.6.冠脈流量
　　模型組再灌注后冠脈流量減少，再灌注20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時作用明顯。對照組和模型組再灌注20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時冠脈流量分別為（184±12）﹑（140±2）d·min-1（P<0.05）；(182±2)﹑（120±2）d·min-1（P<0.01）；(170±8)﹑（105±9）d·m

11、in-1（P<0.01）；(167±12)﹑（102±8）d·min-1（P<0.01）；(163±5)﹑（92±3）d·min-1（P<0.01），給藥組GLPP25、50、100 mg· L-1均能使再灌注后的冠脈流量明顯增加，GLPP50 mg·L-1復(fù)灌20﹑30﹑40﹑50﹑60 min時冠脈流量分別為（163±5）﹑（152±5）﹑（144±3）﹑（140±2）﹑（114±6）d·min-1（P<0.01）。
　　3.

12、心肌組織學(xué)結(jié)構(gòu)
　　HE染色后光鏡下可見缺血再灌注組心肌細胞肌纖維排列紊亂，部分肌纖維溶解液化，胞核固縮，間質(zhì)水腫，炎癥細胞浸潤。給藥組(GLPP25、100 mg·L-1)心肌細胞纖維排列較整齊，胞核結(jié)構(gòu)尚清晰，間質(zhì)輕度水腫，炎癥細胞浸潤較少。
　　4.心肌細胞超微結(jié)構(gòu)
　　電鏡可見缺血再灌注組心肌細胞胞漿凝縮，心肌纖維變模糊，排列紊亂，肌絲、肌節(jié)斷裂溶解；線粒體大量增生，分布紊亂，腫脹變形，有空泡形成；細胞核固縮，

13、核染色質(zhì)濃集。給藥組(GLPP25、100 mg·L-1)心肌細胞肌原纖維排列整齊規(guī)則，線粒體較多，嵴密集，無腫脹和空泡樣變性；細胞核無變形，核膜完整，異染色體和常染色體清晰可見。
　　5.細胞凋亡的測定
　　Tunne l檢測顯示正常組心肌細胞凋亡率為（2.1±1.1）％，模型組的細胞凋亡率為（34.8±2.9）%，給藥組(GLPP6.25﹑25、100 mg·L-1)細胞凋亡率分別為（32.4±1.1）%（P>0.05）

14、、(12.6±2.2)%(P<0.05)、（10.2±1.8）%（P<0.05）。
　　6.Caspase-3的活性測定
　　Western blot檢測結(jié)果顯示，模型組Cleaved Caspase-3蛋白的表達明顯增加，給藥組GLPP25、100mg·L-1能明顯減少Cleaved Caspase-3蛋白的表達。
　　結(jié)論：1.靈芝多糖肽可以保護離體心肌缺血再灌注損傷后的心臟功能。
　　2.靈芝多糖肽可以保護