GPR30激活對(duì)去卵巢大鼠心肌細(xì)胞缺血-再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在細(xì)胞水平建立缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，研究用G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPR30)特異性激動(dòng)劑G1激活GPR30對(duì)去卵巢大鼠心肌細(xì)胞I/R損傷的保護(hù)作用，并進(jìn)一步研究這種保護(hù)作用與β2-腎上腺素受體(β2-adrenergic receptor，β2-AR)及其下游PI3K(phosphoinositide3-kinase，PI3 K)/Akt信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法

2、：成年雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩組：假手術(shù)(Sham)組和雙側(cè)卵巢切除術(shù)(Ovx)組。術(shù)后四周：首先，酶解法分離Ovx組大鼠心肌細(xì)胞，用11nM G1分別預(yù)處理15min，30min，60min后，行缺氧3h復(fù)氧4h模擬I/R損傷，測(cè)定復(fù)氧末心肌細(xì)胞的桿狀率和培養(yǎng)基中LDH的釋放量以確定G1的最佳作用時(shí)間；其次，酶解法分離Sham和Ovx組大鼠心肌細(xì)胞，并分成：①Sham組：Sham組心肌細(xì)胞正常培養(yǎng)；②Ovx組：Ovx組心肌細(xì)胞正常培養(yǎng)；

3、③Ovx+E2組：Ovx組心肌細(xì)胞用1nM17β-雌二醇預(yù)處理24小時(shí)；④Ovx+G1組：Ovx組心肌細(xì)胞用11nM G1預(yù)處理最佳作用時(shí)間，行缺氧3h復(fù)氧4h模擬I/R損傷，測(cè)定復(fù)氧末心肌細(xì)胞收縮功能、凋亡率；最后，①②④組心肌細(xì)胞分別加入β2-AR拮抗劑ICI118，551(55nM)孵育1h和PI3K/Akt拮抗劑LY294002(50μM)孵育1h，行缺氧3h復(fù)氧4h模擬I/R損傷，測(cè)定復(fù)氧末心肌細(xì)胞收縮功能。
　　結(jié)果：

4、1.I/R明顯增加培養(yǎng)基中LDH的釋放量(P<0.01)，減少心肌細(xì)胞的桿狀率(P<0.01)。Ovx+I/R組與Sham+I/R組相比，LDH的釋放量進(jìn)一步增加(P<0.01)，桿狀率進(jìn)一步降低(P<0.01)。與G1預(yù)處理15分鐘和60分鐘相比，用G1預(yù)處理30分鐘，LDH釋放量最低，心肌細(xì)胞桿狀率最高，且與Sham+I/R組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.與Sham組比，Ovx組大鼠心肌細(xì)胞收縮幅度增加(P<0.05)，收縮時(shí)間

5、(TPP)延長(zhǎng)(P<0.05)，舒張時(shí)間(R90)縮短(P<0.05)，加重了心肌損傷，Ovx+E2組和Ovx+G1組都減低了心肌細(xì)胞收縮幅度，縮短了TPP，延長(zhǎng)了R90，兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.與Sham組相比，Ovx組凋亡率明顯升高(P<0.05)，與Ovx組相比，Ovx+G1組凋亡率降低(P<0.05)，Ovx+E2組凋亡率降低(P<0.05)，Ovx+G1組與Ovx+E2組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.與Sham組相比

6、，Ovx組明顯增加大鼠心肌細(xì)胞的收縮幅度(P<0.01)，延長(zhǎng)TPP(P<0.01)，縮短R90(P<0.01)，用G1激活GPR30使其恢復(fù)至Sham組水平。使用β2-AR拮抗劑ICI118，551后，ICI118，551處理組與其對(duì)照組相比，Sham組和Ovx+G1組收縮幅度增加(P<0.01)，TPP延長(zhǎng)(P<0.01)，R90縮短(P<0.01)，但Ovx組沒(méi)有此作用。
　　5.與Sham組相比，Ovx組明顯增加大鼠心肌細(xì)

7、胞的收縮幅度(P<0.01)，延長(zhǎng)TPP(P<0.01)，縮短R90(P<0.01)，用G1激活GPR30使其恢復(fù)至Sham組水平。使用PI3K/Akt特異性阻斷劑LY294002后，LY294002處理組與其對(duì)照組相比，Sham組、Ovx組和Ovx+G1組均收縮幅度增加，TPP延長(zhǎng)，R90縮短。
　　結(jié)論：1.在細(xì)胞水平，用特異性激動(dòng)劑G1激活GPR30可改善I/R損傷的去卵巢大鼠心肌細(xì)胞收縮功能，降低心肌細(xì)胞凋亡率。