木犀草素對(duì)模擬缺血-再灌注損傷的大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:觀察木犀草素(LUT)對(duì)模擬缺血/再灌注(I/R)損傷的大鼠心肌細(xì)胞收縮功能及凋亡的影響。以心肌細(xì)胞存活率、培養(yǎng)基中LDH含量、單個(gè)心肌細(xì)胞的收縮功能及心肌細(xì)胞凋亡率和凋亡相關(guān)因子表達(dá)為觀察指標(biāo),研究LUT對(duì)I/R損傷大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。進(jìn)而為臨床治療心肌缺血/再灌注損傷提供新的藥物治療方案。
　　 方法:酶解法分離正常成年SD大鼠心臟,得到單個(gè)心室肌細(xì)胞,并進(jìn)行培養(yǎng)。正常對(duì)照組(Control組)在正常環(huán)境中

2、孵育29 h;模擬缺血/再灌注組(I/R組)行缺氧3 h復(fù)氧2 h模擬。I/R損傷;木犀草素組(LUT組)加入不同濃度(0.5,1.5,2.5,5.0和10.0μg/mL)的LUT,24 h后行缺氧3 h復(fù)氧2 h模擬I/R損傷。臺(tái)盼蘭染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率;酶學(xué)法測(cè)培養(yǎng)基中LDH含量;最后測(cè)定細(xì)胞在異丙腎上腺素(ISO)刺激狀態(tài)下的收縮幅度,收縮時(shí)間和舒張90％的時(shí)間,并以此確定LUT的最佳濃度。Control組、I/R組和LUT最

3、佳濃度組,采用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Western blot法檢測(cè)Caspase3、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.與Control組相比較,模擬FR損傷能夠明顯地降低心肌細(xì)胞ISO刺激收縮幅度,延長(zhǎng)細(xì)胞收縮時(shí)間,縮短細(xì)胞舒張時(shí)間,增加細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH的釋放量,加重了心肌細(xì)胞壞死。而用不同濃度的LUT處理以后能夠不同程度地減輕大鼠心肌細(xì)胞損傷,其中以LUT2.5組效果最佳,明顯提高心肌細(xì)胞

4、收縮幅度,延長(zhǎng)細(xì)胞舒張時(shí)間,縮短細(xì)胞收縮時(shí)間,改善心肌細(xì)胞的收縮功能,減少LDH釋放,減少心肌細(xì)胞壞死,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.與Control組相比較,模擬I/R損傷能夠明顯地增加心肌細(xì)胞凋亡率,而LUT2.5組能夠抑制心肌細(xì)胞的凋亡,上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá),下調(diào)Bax及Caspase3蛋白表達(dá),降低了Bax/Bcl-2比值。
　　 結(jié)論:
　　 1.木犀草素能夠改善模擬缺血/再灌注損傷后大鼠心肌細(xì)胞