依達拉奉對膿毒癥大鼠心肌細胞保護作用的研究.pdf

1、研究目的:
　　 本研究擬建立大鼠膿毒癥模型，通過檢測依達拉奉對膿毒癥大鼠血清肌鈣蛋白T(CTnT)，心肌組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)表達的影響，以及對心肌細胞進行光鏡、電鏡觀察，探討依達拉奉對膿毒癥大鼠心肌組織的保護作用及其可能的機制。
　　 材料與方法:
　　 1、實驗分組
　　 SD大鼠54只，隨機分成3組：對照組(18只)、膿毒癥組

2、(18只)和治療組(18只)。對照組大鼠腹腔內注射生理鹽水(NS)，30min后予NS經(jīng)鼠尾靜脈注射；膿毒癥組大鼠腹腔內注射脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，于注射LPS后30min予NS經(jīng)鼠尾靜脈注射；治療組大鼠于注射LPS后30min予依達拉奉3mg/kg經(jīng)鼠尾靜脈注射。各組動物按照觀察時間點隨機分為造模后6h、12h和24h各3個亞組。
　　 2、模型制作
　　 健康雄性SD大鼠，稱重，用卵圓

3、鑷夾住大鼠頸背部皮膚令其懸空，剪去腹部鼠毛，2％碘酒、75％酒精消毒后，經(jīng)腹腔注射LPS(10mg/kg)，制備膿毒癥動物模型。
　　 3、檢測指標和方法
　　 取造模后6h、12h和24h相應實驗組的大鼠，行腹主動脈采血5ml，取其上清，酶聯(lián)免疫分析法檢測血清CTnT含量；快速分離右側心臟大部分心臟組織，制成組織勻漿，取其上清，酶聯(lián)免疫分析法檢測心肌腫瘤壞死因子(TNF-α)含量，化學比色法測定心肌NO、SOD、MDA

4、含量；快速分離左側心臟組織，用10％甲醛液固定，制成石蠟切片，H.E染色，光學顯微鏡下觀察標本形態(tài)學變化；分離右側心臟小部分心臟組織，加入2.5％戊二醛固定液中固定，電鏡觀察。
　　 4、統(tǒng)計學處理
　　 本研究的數(shù)據(jù)采取SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，計量資料均以均數(shù)±標準差((-x)±S)表示；多組間比較用方差分析；對于不同處理組的兩兩比較，主要利用了LSD-t法檢驗。以p＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

5、>　　 結果:
　　 1、血清CTnT含量的變化
　　 在6h時、12h時和24h時點各組血清中CTnT濃度，膿毒癥組＞治療組＞對照組，各組之間有顯著差異(p＜0.01)。膿毒癥組和治療組CTnT在12h達到高峰。
　　 2、心肌勻漿TNF-α的變化
　　 在6h、12h和24h時點上各組心肌勻漿TNF-α水平，膿毒癥組＞治療組＞對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組心肌勻漿中的TN

6、F-α在6h時達到高峰，隨著建模時間的延長，心肌勻漿中的TNF-α逐漸回落；同一組內各時點之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 3、心肌勻漿MDA的變化
　　 在6h、12h和24h時點上各組心肌勻漿中MDA的表達，膿毒癥組＞治療組＞對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組隨著建模時間的延長，心肌勻漿中MDA的表達逐漸增高；同一組內各時點之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。

7、　　 4、心肌勻漿SOD活性的變化
　　 在6h和12h時點各組心肌勻漿中SOD活性，膿毒癥組＜對照組＜治療組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；在24h時點心肌勻漿中SOD活性，膿毒癥組＜對照組，膿毒癥組＜治療組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，治療組＜對照組，但差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。膿毒癥組和治療組隨著建模時間的延長，心肌勻漿中SOD活性逐漸下降；同一組內各時點之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。

8、r>　　 5、心肌勻漿NO含量的變化
　　 在6h、12h和24h時點各組心肌勻漿中的NO含量，膿毒癥組＞治療組＞對照組，各組之間差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組心肌勻漿中的NO含量隨著建模時間的延長，逐漸增加；同一組內各時點之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 6、心肌組織光鏡下的變化
　　 對照組心肌組織結構正常。膿毒癥組心肌纖維束排列疏松，心肌纖維斷裂、溶解，心肌細胞嗜酸性

9、變，心肌間質水腫，炎癥細胞浸潤。隨著建模時間的延長，可見部分心肌細胞變性，間質水腫加重。治療組與膿毒癥組相比，心肌細胞斷裂、溶解減輕，間質水腫明顯改善。
　　 7、心肌組織電子顯微鏡下的變化
　　 對照組心肌纖維、線粒體結構正常，心肌纖維排列整齊，核膜平整，染色質均勻，心肌閏盤結構正常。膿毒癥組心肌纖維排列紊亂，心肌細胞肥大、斷裂，閏盤分離，線粒體增生、腫脹，嵴減少；心肌組織間質水腫。治療組與膿毒癥組相比，心肌纖維排列紊