TNF-α對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：探討TNF-α單克隆抗體(infliximab)和TNF-α抑制劑(pentoxifylline，PTX)對大鼠肝臟缺血再灌注(ischemia/reperfusion，IR)損傷的影響，尋找有效減輕缺血再灌注損傷(ischemia/reperfusion injury，IRI)的途徑，為指導(dǎo)臨床工作提供依據(jù)。
　　 方法：分三部分：
　　 第一部分：建立Sprague Dawley(SD)大鼠肝臟IRI模型，肝固

2、有動(dòng)脈持續(xù)阻斷1h后開放，48只SD大鼠按照再灌注時(shí)間隨機(jī)分成8組：再灌注0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h及假手術(shù)(sham operation，SO)組(n=6)。利用全自動(dòng)生化分析儀檢測各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)及組織學(xué)HE染色等初步確定IRI發(fā)生。進(jìn)一步用二苯胺法檢測DNA片段化率、原位末端凋亡法(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUN

3、EL)檢測肝細(xì)胞凋亡、免疫組織化學(xué)法檢測肝細(xì)胞核增殖抗原(Ki67)的變化。
　　 第二部分：24只SD大鼠隨機(jī)分成4組：infliximab假手術(shù)組、生理鹽水(NS)假手術(shù)組、infliximab+IR組和NS+IR對照組。檢測血清中的ALT、AST和肝組織中的DNA片段化率、HE染色、原位凋亡及Ki67等指標(biāo)，檢測方法同第一部分。
　　 第三部分：12只SD大鼠隨機(jī)分成PTX+IR組和NS對照組，檢測ALT、AST和

4、肝組織中的DNA片段化率、HE染色及Ki67等，檢測方法同第一部分。
　　 結(jié)果：第一部分：與SO組相比，ALT在再灌注1h、6h、12h、24h組明顯升高(P＜0.05)；AST在再灌注3h、6h、12h、24h組明顯升高(P＜0.05)；DNA片段化率在再灌注0h、1h、3h、6h、12h組顯著增加(P＜0.05)；HE染色結(jié)果顯示隨著再灌注時(shí)間增加，肝細(xì)胞出現(xiàn)逐漸加重的細(xì)胞腫脹和空泡變性，并于6h達(dá)到高峰。TUNEL染色結(jié)

5、果顯示從再灌注0h到6h，肝細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增加(P＜0.05)，Ki67染色結(jié)果顯示從再灌注1h到6h，陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加(P＜0.05)。
　　 第二部分：與NS+IR組相比，infliximab+IR組血清中ALT、AST有顯著升高(P＜0.05)，組織HE染色見損傷明顯加重，DNA片段化率明顯增加(P＜0.05)，TUNEL染色陽性細(xì)胞數(shù)量顯著上升(P＜0.05)，Ki67陽性細(xì)胞明顯減少(P＜0.05)。