消退素D1對TGF-β1誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細胞EMT的影響.pdf

1、目的:
　　上皮細胞一間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指完全分化的上皮細胞經(jīng)過表型轉(zhuǎn)化，獲得間質(zhì)細胞特征的生物學(xué)過程。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，EMT可能是組織器官纖維化的一個重要原因。受損的肺泡上皮細胞發(fā)生EMT，轉(zhuǎn)化為成纖維細胞和肌成纖維細胞，與肺纖維化有密切的關(guān)系。促炎癥消退介質(zhì)消退素D1具有抗炎促消退的作用。最新的研究表明，消退素D1在腫瘤細胞的EMT過程中具有一定的抑

2、制作用。然而對于各種誘因引起的肺泡上皮細胞EMT發(fā)生發(fā)展過程中，消退素D1是否同樣具有干預(yù)作用缺乏相應(yīng)的研究。因此，本研究的目的是通過建立TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮細胞EMT模型，探討消退素D1對此生物學(xué)過程是否具有干預(yù)作用。
　　方法:
　　1.用胰酶消化、免疫和差時貼壁法分離純化SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞。
　　2.將培養(yǎng)48小時后的肺泡Ⅱ型上皮細胞隨機分成4組:①正常對照組(control，培養(yǎng)基不加任

3、何藥物)，②TGF-β1組(TGF-β1，10ng/ml)，③TGF-β1+RvD1組（10ng/ml TGF-β1+100nmol/ml resolvinD1）④溶劑對照組(10ng/ml TGF-β1+0.19 ul/ml alcohol)。
　　3.藥物作用72小時后，顯微鏡下觀察肺泡Ⅱ型上皮細胞形態(tài)的改變。
　　4.用蛋白印跡法(western blot)檢測藥物作用72h前后肺泡Ⅱ型上皮細胞中上皮細胞標志E-cad

4、herin，間質(zhì)細胞標志α-SMA蛋白的表達。
　　5.CCK-8檢測藥物作用72h后各組細胞的增殖情況。
　　6.采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用Newmankeuls檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.顯微鏡下觀察藥物處理72h后肺泡Ⅱ型上皮細胞形態(tài)學(xué)的改變:正常對照組

5、細胞呈鵝卵石狀，細胞連接成片，胞漿內(nèi)可看到顆粒狀物;TGF-β1組細胞形態(tài)梭形樣改變，與成纖維細胞相似，細胞與細胞連接變得松散，幾乎見不到正常的細胞形態(tài);TGF-β1+RvD1組出現(xiàn)梭形細胞與正常細胞共存狀態(tài)，且梭形細胞形態(tài)有所改善，細胞連接較緊密，可見正常細胞形態(tài);TGF-β1+alcohol組細胞形態(tài)與TGF-β1組相似。
　　2.肺泡Ⅱ型上皮細胞E-cadherin蛋白表達量:與正常對照組相比，TGF-β1組與溶劑對照組E-

6、cadherin蛋白表達明顯降低(P＜0.05);與TGF-β1組相比，TGF-β1+RvD1組E-cadherin蛋白表達明顯升高(P＜0.05)。
　　3.肺泡Ⅱ型上皮細胞α-SMA蛋白表達量:與正常對照組相比，TGF-β1組與溶劑對照組α-SMA蛋白表達明顯升高(P＜0.05);與TGF-β1組相比，TGF-β1+RvD1組α-SMA蛋白表達明顯降低(P＜0.05)。
　　4.藥物作用72h后，各組肺泡Ⅱ型上皮細胞增殖

7、情況比較:與正常對照組相比，其他三組均無明顯增殖情況;四組細胞的增殖情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.TGF-β1在一定條件下，可使正常分化的肺泡Ⅱ型上皮細胞發(fā)生EMT。
　　2.RvD1可改善TGF-β1引起的肺泡Ⅱ型上皮細胞向梭形細胞轉(zhuǎn)化的程度，在一定程度上保持細胞間的緊密連接。
　　3.在肺泡Ⅱ型上皮細胞發(fā)生的EMT中，RvD1可上調(diào)TGF-β1引起的上皮細胞標志E-cadherin蛋白表達量的降